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透明質(zhì)酸修飾殼聚糖/pDNA納米微球的制備及體外轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞

作者:趙慧清; 盧華定; 王昆; 溫小粵; 史德海 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院骨科; 廣州510630

摘要:目的以透明質(zhì)酸(HA)修飾基因載體殼聚糖(CS)納米微球,制作一種新型的HA/CS/pDNA基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng),觀察其結(jié)構(gòu)特征及體外對(duì)軟骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)染能力。方法將不同比例的HA和CS與負(fù)載增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因(EGFP)的質(zhì)粒DNA(pDNA)以復(fù)凝聚法制成納米微球,以?huà)呙桦婄R檢測(cè)納米微球形態(tài),Zeta電位粒度分析儀測(cè)定其粒徑、表面電位;凝膠電泳阻滯實(shí)驗(yàn)觀察CS和pDNA的結(jié)合力;體外轉(zhuǎn)染兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,以流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果HA/CS/pDNA納米微球多呈球形,粒徑為(223±51)mm,表面Zeta電位為(17.4±6.1)mV,可有效保護(hù)pDNA免受DNaseⅠ的降解。體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證明HA/CS/pDNA納米微球能介導(dǎo)pEGFP轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)綠色熒光蛋白,轉(zhuǎn)染率達(dá)(15.450±0.404)%,比裸pDNA組和CS/pDNA組有更高的轉(zhuǎn)染效率(P〈0.05)。結(jié)論復(fù)凝聚法制備的HA/CS/pDNA納米微球是一種有效的新型非病毒基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng),對(duì)軟骨細(xì)胞有著潛在的靶向基因轉(zhuǎn)染能力。

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