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豬圓環(huán)病毒3型SYBR greenⅠ熒光定量PCR方法建立及初步應用

作者:呂素芳; 李峰; 郭廣君; 魏鳳; 張文通; 沈志強 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中心; 山東濱州256600; 山東綠都生物科技有限公司; 山東濱州256600

摘要:為建立一種快速、特異、敏感的SYBR greenⅠ實時定量PCR方法,檢測豬圓環(huán)病毒3型(PCV3)在感染豬體內(nèi)的分布情況和病毒含量,本研究根據(jù)PCV3的cap基因序列設計1對引物,對反應條件、反應體系進行優(yōu)化,建立了檢測PCV3 cap基因的SYBR greenⅠ實時定量PCR方法,并對動物回歸試驗后剖檢的病料組織進行了檢測。結果,該方法比傳統(tǒng)PCR方法靈敏度高100倍,可達3.04×10^2拷貝/μL,且具有良好的特異性和重復性。在不同病料組織中均可檢測到PCV3,但不同感染豬、不同組織病毒檢出及含量有差異,其中肝臟、肺臟、頜下淋巴結中病毒含量顯著高于心臟、心包肌、腎臟等;肝中病毒拷貝數(shù)最高,達1.16×10^6拷貝/μL,表明PCV3具有一定的組織嗜性。該方法可用于PCV3的病原學監(jiān)測、流行病學調(diào)查及定量研究。

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中國獸醫(yī)學報

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