摘要：細(xì)菌在翻譯過程中,mRNA受到損傷(如缺失終止密碼子)時會使翻譯提前終止,導(dǎo)致核糖體熄火,細(xì)菌自身會啟動核糖體拯救途徑。由tmRNA-SmpB介導(dǎo)的反式翻譯系統(tǒng)是結(jié)核分枝桿菌中的核糖體拯救途徑,對結(jié)核分枝桿菌的生長繁殖有重大影響。為探究分枝桿菌中反式翻譯途徑的啟動及其功能特點(diǎn),本研究選取恥垢分枝桿菌為實(shí)驗(yàn)菌株,分別以 mCherry和egfp 作為報告基因,通過在報告基因3 ′端添加大腸埃希菌終止子序列,構(gòu)建能在菌體中反映反式翻譯表達(dá)的報告體系,并初步探究該體系中報告基因的動態(tài)表達(dá)特點(diǎn)。結(jié)果顯示,相比正常表達(dá)mCherry的對照菌株,實(shí)驗(yàn)菌株中表達(dá)的錯誤mCherry蛋白很快被水解,菌體顏色均明顯淺于前者,增強(qiáng)綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)定量檢測數(shù)據(jù)也顯示錯誤EGFP水平顯著低于正常表達(dá)的EGFP水平,表明兩種反式翻譯報告體系均構(gòu)建成功。報告基因的動態(tài)表達(dá)數(shù)據(jù)顯示,蛋白出現(xiàn)翻譯異常時,恥垢分枝桿菌可在蛋白翻譯過程中快速啟動反式翻譯途徑,并于 40~ 45 h將不成熟錯誤蛋白完全水解。本研究構(gòu)建的反式翻譯報告體系可為后續(xù)開展分枝桿菌反式翻譯途徑的功能研究及抗結(jié)核藥物篩選提供幫助。