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小桐子低溫脅迫下microRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參的篩選與比較

作者:孔春艷; 陳永坤; 王莎莎; 郝大海; 楊宇; 龔明 云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院; 生物能源持續(xù)開(kāi)發(fā)利用教育部工程研究中心; 云南省生物質(zhì)能與環(huán)境生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 昆明650500

摘要:選擇合適的內(nèi)參對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)結(jié)果的準(zhǔn)確性極其重要,在microRNA(miRNA)的qRT-PCR分析中尤為如此。通過(guò)篩選適宜分析小桐子低溫脅迫下miRNA定量表達(dá)的內(nèi)參,為小桐子及其他物種miRNA的qRT-PCR分析提供有用的理論參考?;谝郧暗男NA-seq結(jié)果,以低溫處理的小桐子為材料,挑選11個(gè)候選內(nèi)參基因,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)它們?cè)诓煌瑯颖局械谋磉_(dá)量,采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper軟件進(jìn)行表達(dá)穩(wěn)定性綜合分析。結(jié)果表明,表達(dá)最穩(wěn)定的基因是miR6448和U6,miR6448的Ct值為23左右,表達(dá)豐度適中;U6的Ct值為10左右,表達(dá)豐度高;因此,miR6448可作為小桐子低溫脅迫下表達(dá)豐度適中的miRNA qRT-PCR的內(nèi)參基因;U6可作為小桐子低溫脅迫下豐度較高的miRNA qRT-PCR的內(nèi)參基因。

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