摘要：貽貝素(Mytilins)是一類主要在貝類血細(xì)胞中表達(dá)的陽(yáng)離子小分子抗菌肽,包括多種同工型,它們?cè)诿庖呦到y(tǒng)中發(fā)揮了重要作用,Mytilin-1是其中的一種同工型。厚殼貽貝(Mytilus coruscus)Mytilin-1的一級(jí)結(jié)構(gòu)由信號(hào)肽、成熟肽和C端的延伸肽組成;其成熟肽決定了Mytilin-1的生物學(xué)活性,它由34個(gè)氨基酸殘基組成,其中8個(gè)保守的半胱氨酸殘基在空間上能形成4對(duì)二硫鍵,對(duì)Mytilin-1的穩(wěn)定性和活性起了關(guān)鍵作用。以厚殼貽貝的Mytilin-1成熟肽為重組DNA表達(dá)的目的蛋白,根據(jù)畢赤酵母(Pichia pastoris)的密碼子偏愛(ài)性對(duì)編碼該成熟肽的密碼子進(jìn)行優(yōu)化,合成的目的基因“mMy1”與表達(dá)載體pPICZαA連接后電轉(zhuǎn)至畢赤酵母X-33,通過(guò)高濃度博來(lái)霉素篩選高拷貝酵母轉(zhuǎn)化子,獲得的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子在29℃、250 r/min、pH6.0的條件下,使用1%甲醇誘導(dǎo)表達(dá)96 h;培養(yǎng)液上清經(jīng)Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析證明:重組mMy1在畢赤酵母X-33中得到成功表達(dá),其分子量為4.8 kD。抑菌試驗(yàn)表明,重組mMy1對(duì)革蘭氏陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)以及革蘭氏陰性的大腸桿菌(Escherchia coli)具有抑菌活性。