摘要：[目的]建立穩(wěn)定可靠的、適合檢測紅豆杉(TaxusL.)TbAP2基因表達(dá)量的熒光定量PCR實驗體系。對于檢測該物種中基因的組織特異性表達(dá)具有重要意義。[方法]以曼地亞紅豆杉細(xì)胞為試材,提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA,根據(jù)TbAP2基因序列設(shè)計多對引物,合成內(nèi)參基因TBC41的引物,采用正交試驗L9(3^4)方法分別篩選以上2個基因5μL和10μL小反應(yīng)體系及20μL常用體系中的最佳組合,并通過cDNA模板用量和引物用量等方面進(jìn)行優(yōu)化,以確?；驍U(kuò)增效率在90%~105%之間。[結(jié)果]本研究建立了TBC41和TbAP2基因在5、10、20μL體系下的熒光定量最佳PCR反應(yīng)體系,在優(yōu)化后的5μL體系下,加入Mix(2×)Universal2.5μL,cDNA模板1.0μL,正反引物共1.5μL,內(nèi)參基因TBC41和目的基因TbAP2的擴(kuò)增效率均為94%;在優(yōu)化后的10μL下,加入Mix(2×)Universal5μL,cDNA模板1.2μL,正反引物共1.3μL,TBC41和TbAP2的擴(kuò)增效率分別為95%和94%。在優(yōu)化后的20μL下,加入Mix(2×)Universal10μL,cDNA模板0.5μL,正反引物共1.5μL,TBC41和TbAP2的擴(kuò)增效率分別為93%和99%,以上各擴(kuò)增體系回歸系數(shù)R2均大于0.980。[結(jié)論]在以上3種反應(yīng)體系下,內(nèi)參基因和目的基因均具有接近100%的擴(kuò)增效率,表明本研究成功建立了適合檢測紅豆杉TbAP2基因表達(dá)量的熒光定量PCR實驗體系,并為紅豆杉其它基因的表達(dá)研究提供參考。