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日本血吸蟲成蟲抗原通過ROS誘導(dǎo)人LX-2肝星狀細(xì)胞NLRP3炎癥小體活化和膠原表達(dá)

作者:朱燕楠; 繆婷婷; 王偉; 陸忠奎; 劉勁峰; 王勇 南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系、江蘇省現(xiàn)代病原生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 江蘇南京211100

摘要:為了探討日本血吸蟲成蟲抗原(SWA)對(duì)LX-2細(xì)胞NLRP3炎癥小體活化和纖維化相關(guān)基因表達(dá)的影響,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同濃度(0、25、50、100μg/mL)的SWA刺激LX-2細(xì)胞,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot檢測(cè)細(xì)胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的基因和蛋白表達(dá),ELISA檢測(cè)細(xì)胞IL-1β 的分泌水平;同時(shí)使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測(cè)細(xì)胞活性,乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞LDH的釋放;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SWA刺激對(duì)LX-2細(xì)胞中ROS產(chǎn)生的影響;之后使用ROS清除劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)處理細(xì)胞,檢測(cè)NLRP3、IL-1β、Caspase-1、 α-SMA、ColⅠ基因和蛋白的表達(dá)水平.結(jié)果顯示,當(dāng)SWA的濃度達(dá)100μg/mL時(shí),LX-2細(xì)胞內(nèi)NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的mRNA的表達(dá)與對(duì)照組相比均明顯升高,同時(shí)相關(guān)蛋白的表達(dá)和IL-1β的分泌也顯著升高.流式檢測(cè)結(jié)果顯示,SWA刺激LX-2細(xì)胞后能顯著增加細(xì)胞內(nèi)ROS的生成,并在NAC處理后,可見明顯抑制細(xì)胞內(nèi)ColⅠ和炎癥小體活化相關(guān)的基因和蛋白的表達(dá).結(jié)果提示,SWA可以誘導(dǎo)LX-2細(xì)胞內(nèi)炎癥小體活化和膠原表達(dá),并且ROS反應(yīng)可能在介導(dǎo)NLRP3活化中發(fā)揮重要的作用.

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寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào)

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