時(shí)間：2023-08-30 16:26:45
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關(guān)鍵詞：海綿城市；城市環(huán)境；作用及淺析
引言：主席高度重視城市化發(fā)展的質(zhì)量，并且發(fā)表了“加強(qiáng)海綿城市建設(shè)”的講話，明確指出要大力構(gòu)建“海綿城市”。目前海綿城市理念在多個(gè)發(fā)達(dá)國家，如美國、加拿大、新加坡、日本等都發(fā)揮了巨大的功效，我國海綿城市理念的提出相對較晚，要善于借鑒發(fā)達(dá)國家的成功經(jīng)驗(yàn)。建設(shè)海綿城市，是實(shí)現(xiàn)城市建設(shè)和自然生態(tài)系統(tǒng)協(xié)調(diào)發(fā)展重大舉措，從根本上解決“城市病”，推動(dòng)我國城市發(fā)展早日走上生態(tài)化、持續(xù)化的道路，實(shí)現(xiàn)城市發(fā)展的可持續(xù)。
一、海綿城市的概念和特征
1.海綿城市的概念
我國《海綿城市建設(shè)技術(shù)指南―――低影響開發(fā)雨水系統(tǒng)構(gòu)建》中對海綿城市的概念進(jìn)行明確了定義：指城市能夠像海綿一樣，在適應(yīng)環(huán)境變化和應(yīng)對自然災(zāi)害等方面具有良好的“彈性”，下雨時(shí)吸水、蓄水、滲水、凈水，需要時(shí)將蓄存的水“釋放”并加以利用。在這一“吸”一“收”的過程中實(shí)現(xiàn)了城市內(nèi)部良性的水循環(huán)系統(tǒng)，還能自動(dòng)吸收水系統(tǒng)的污染物質(zhì)，保持城市水土。
2.海綿城市的特征
第一，注重城鎮(zhèn)化和自然環(huán)境的協(xié)調(diào)發(fā)展，在對城市地下水、自來水等進(jìn)行存儲(chǔ)、排放、使用時(shí)不是依靠傳統(tǒng)的地下管道而是依靠城市自然環(huán)境綜合利用各種措施吸收、存儲(chǔ)大氣降水和地下水，進(jìn)而緩解城市的洪澇問題；第二，讓城市“彈性適應(yīng)”環(huán)境變化與自然災(zāi)害，海綿城市建設(shè)思路不僅注重恢復(fù)和保持城市內(nèi)部的水系統(tǒng)，更注重原有自然生態(tài)系統(tǒng)的保護(hù)，重視城市系統(tǒng)的自我調(diào)節(jié)；第三，轉(zhuǎn)變了排水防澇思路，海綿城市徹底摒棄了“快排式”傳統(tǒng)的排水模式，在城市排澇過程中始終堅(jiān)持“滲、滯、蓄、凈、用、排”的六字方針；第四，開發(fā)前后的水文特征基本不變，海綿城市構(gòu)建了一個(gè)良性的水系統(tǒng)。
二、分析“海綿城市”對城市環(huán)境的作用
根據(jù)《指南》的相關(guān)規(guī)定，海綿城市建設(shè)規(guī)劃實(shí)施的主要內(nèi)容包括以下幾點(diǎn)：：一是充分保護(hù)城市原有生態(tài)系統(tǒng)；二是對已經(jīng)受到破壞的自然環(huán)境及水體進(jìn)行修復(fù)；三是低影響開發(fā)。海綿城市的建設(shè)對解決城市內(nèi)澇問題、調(diào)節(jié)地下水、凈化水中污染物質(zhì)、維護(hù)自然生態(tài)環(huán)境的多樣性、美化城市環(huán)境等發(fā)揮了巨大功效。
1.緩解城市內(nèi)澇問題
海綿城市建設(shè)理念在城市發(fā)展過程中的應(yīng)用，起初就是從解決城市雨洪問題出發(fā)，發(fā)揮著雨洪調(diào)蓄、雨水資源收集利用與地下水涵養(yǎng)等作用，完善城市雨水管理體系。海綿城市的建設(shè)，改變了以往單純使用市政地下排水管道和泵站的現(xiàn)狀，側(cè)重于依靠城市自然生態(tài)系統(tǒng)來吸收、存儲(chǔ)、排放降水，綜合利用自然生態(tài)調(diào)節(jié)和人為調(diào)節(jié)措施來緩解城市內(nèi)澇問題。
群力雨洪公園是海綿城市建設(shè)理念運(yùn)用的一大成功案例。該區(qū)域在歷史上是洪澇災(zāi)害多發(fā)區(qū)，在對其進(jìn)行設(shè)計(jì)的過程中，以保護(hù)濕地為原則，巧妙的將其打造成收集雨水、儲(chǔ)蓄雨洪、下滲雨水、補(bǔ)充城市地下水、涵養(yǎng)水源、凈化水中污染物質(zhì)、增加生物多樣性等功能于一體的濕地公園。在具體實(shí)施的環(huán)節(jié)中，盡量保持原有的濕地區(qū)域，群力雨洪公園成功的運(yùn)用了海綿城市建設(shè)理念，濕地公園的開發(fā)，為調(diào)節(jié)濕地公園的生態(tài)系統(tǒng)發(fā)揮了巨大的作用。
群力雨洪公園的成功案例實(shí)現(xiàn)了緩解城市內(nèi)澇帶來的問題和危害，增強(qiáng)城市排水系統(tǒng)的能力，通過協(xié)調(diào)市政道路和地下排水管之間的關(guān)系，增大城市的綠色植被覆蓋率，完善城市水系統(tǒng)等措施來達(dá)到排澇的目的，確保在雨季時(shí)城市市民依然享受安逸的生活。
2.形成良性的水循環(huán)系統(tǒng)
海綿城市的建立，不僅有效的減輕城市洪澇災(zāi)害，還能夠緩解我國水資源不足、水質(zhì)惡化的局面，為建立良性的水生態(tài)系統(tǒng)提供助力。
武夷新區(qū)踐行“海綿城市”在此方面取得了非常成功的效果。其主要理念體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：一是注重對森林生態(tài)的修復(fù)工作，閩北地區(qū)原生態(tài)的森林在被人為的濫砍亂伐之后正呈現(xiàn)急劇下降的趨勢，鼓勵(lì)當(dāng)?shù)亓洲r(nóng)還林于上，加大對林業(yè)種植的補(bǔ)貼力度；二是城市生態(tài)修復(fù)同樣不可忽視，一些貼近地面的建筑如廣場、硬地、建筑等工程在材料的選擇上采用通氣、透水性較好的；三是恢復(fù)和修復(fù)自然生態(tài)環(huán)境，保持生態(tài)物種的多樣性，擴(kuò)大生態(tài)用地的面積，凈化水資源，淡化水質(zhì)，減少暴雨對城市的影響。
筆者認(rèn)為，海綿城市就像被放大了的“濕地”一樣，最大程度的修復(fù)城市原有的水生態(tài)系統(tǒng)，注重開發(fā)雨水的滲透、調(diào)蓄、凈化、利用等綜合作用，實(shí)現(xiàn)雨洪資源的有效利用，使地表徑流和地下徑流維持著一定的徑流量。森林植被、濕地等大大提升地下水的涵養(yǎng)能力，凈化水質(zhì)，吸收水中的污染物質(zhì)，確保居民生產(chǎn)和生活用水的安全性，促進(jìn)雨水資源的利用和生態(tài)環(huán)境保護(hù)，同時(shí)實(shí)現(xiàn)地表水、地下水和自然降水三者之間的平衡循環(huán)。
3.保持城市水土
不可否認(rèn)，城市水土保持是實(shí)現(xiàn)涵養(yǎng)水源、防風(fēng)固沙、提供動(dòng)植物棲息地等的關(guān)鍵，而海綿城市的建設(shè)，又能夠給城市水土保持工作的雨水控制環(huán)節(jié)提供便捷。在建設(shè)海綿城市的過程中，做到了開發(fā)前后的水文特征基本不變，始終堅(jiān)持低影響開發(fā)的原則，城市水土保持離不開對雨水的控制。
比如，我國投資建設(shè)的重慶海綿城市，其建立了完整的防水控制，也因?yàn)橹貞c地處高原，山地較多，在進(jìn)行海綿城市建設(shè)的時(shí)候發(fā)展了綠化工程，讓綠色植被對城市的水土進(jìn)行保持。雨水較多季節(jié)植被能夠吸收水分，保持水源，對于雨水能夠做到有效控制。并且，綠色植被與重慶城市的人文特征相符，也是海綿城市與其人文氣息相得益彰構(gòu)建之處。
鑒于此，筆者從海綿城市建設(shè)和城市水土保持出發(fā)提出以下建議：一是結(jié)合海綿城市建立起合適的雨水控制利用設(shè)施，做到真正的系統(tǒng)優(yōu)化；二是加強(qiáng)對水土保持工作的監(jiān)測，糾正雨水控制期雨水控制的不當(dāng)之處；三是注重低影響開發(fā)理念和水土保持臨時(shí)排水措施相結(jié)合；四是政府部門要積極引進(jìn)和開發(fā)雨水利用控制系統(tǒng)的新工藝、新技術(shù)、新手段等。
4.改善城市的人文和自然景觀
在實(shí)施“建設(shè)海綿城市”的規(guī)劃策略時(shí)，對居住區(qū)和城市道路進(jìn)行分割，增大了建設(shè)綠地的用地面積，合理的修建了廣場，廣場鋪裝多采用透水式鋪裝，城市道路人行道也采用了透水式鋪裝的方法，增強(qiáng)了城市內(nèi)部的水循環(huán)系統(tǒng)；另外，城市內(nèi)濕地、公園面積增大，提供了良好的生態(tài)環(huán)境。
比如，嘉興海綿城市的建設(shè)，便是對居住區(qū)和城市道路進(jìn)行有效規(guī)劃，開墾綠地面積，增加綠化建設(shè)，讓百姓在享受到其“海綿”作用的同時(shí)還能夠欣賞到美麗景色，增添了城市的人文氣息，美化了城市的自然景觀，可以說是一箭雙雕。嘉興海綿城市建設(shè)是全國海綿城市建設(shè)的標(biāo)桿，也得到了全國各地的爭相效仿。
結(jié)語：
海綿城市的建設(shè)是實(shí)現(xiàn)城市化和自然生態(tài)系統(tǒng)協(xié)調(diào)發(fā)展的有效途徑，有力克服了城市化發(fā)展過程中的問題。當(dāng)前，無論城市規(guī)模的大小，建設(shè)海綿城市已經(jīng)是大勢所趨，其推動(dòng)了新型城鎮(zhèn)的建設(shè)，在城市化發(fā)展中貫徹落實(shí)了以人為本的思想理念。
參考文獻(xiàn)
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關(guān)鍵詞：海綿城市；生態(tài)環(huán)境；雨水花園
中圖分類號：S26文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：16749944（2016）18016203
1引言
中國是水資源嚴(yán)重匱乏的國家之一，水資源人均占有量不足世界人均水平的1/3。近年來，隨著城市化進(jìn)程的不斷加快，水資源短缺和污染問題在城市發(fā)展過程當(dāng)中尤為突出。在城市生態(tài)系統(tǒng)中，某些城市存在城市供水不足，城市建設(shè)用水安全等問題，而有些城市的工業(yè)污水也造成城市生態(tài)系統(tǒng)惡化，生活用水得不到保障[2]。因此，合理有效地利用水資源，緩解城市用水壓力，優(yōu)化水資源利用、排放、凈化模式就成為社會(huì)各界廣泛關(guān)注和研究的重點(diǎn)問題。基于此，本文就針對海綿城市建設(shè)過程對雨水的處理利用問題進(jìn)行分析，并提出一些合理化意見和建議[3]。
2海綿城市的內(nèi)涵
海綿城市是指在城市發(fā)展建設(shè)過程中，充分發(fā)揮道路、城市水系、建筑以及綠地等設(shè)施對雨水的吸收、滲透、儲(chǔ)存、凈化和緩解作用，控制雨水徑流，如同“海綿”一樣，對于環(huán)境的變化和突發(fā)的自然災(zāi)害等方面具有良好的適應(yīng)性，也就是“彈性”?！昂＞d城市”一詞的提出是在新時(shí)期下，為了緩解和解決我國飛速發(fā)展的城市化與脆弱的城市水體矛盾而提出的，“滲、蓄、滯、用、排”五位一體，落實(shí)：“節(jié)水優(yōu)先、空間均衡、系統(tǒng)治理、兩手發(fā)力”的原則。
海綿城市的發(fā)展理念在國外提出較早，主要思想是解決城市雨水問題，它包括：低影響開發(fā)（LID）、最佳管理措施（BMP）、綠色基礎(chǔ)設(shè)施（GI），相關(guān)理論研究的目的是有效控制農(nóng)村以及城市的面狀污染源＼[3、4＼]，隨后逐漸發(fā)展成為控制降雨徑流量和水質(zhì)的生態(tài)可持續(xù)的綜合性措施。而其中又以低影響開發(fā)理論為核心，即基于生態(tài)文明和景觀建設(shè)為主的雨水管理方法，主要是在一定的區(qū)域內(nèi)利用軟工程技術(shù)，通過植被自身的特點(diǎn)實(shí)現(xiàn)就地處理降水，直接減少地表雨水徑流量[5]。也就是說從源頭控制雨水徑流，其具體的方法包括建設(shè)雨水花園、綠色屋頂、城市下凹綠地等設(shè)施；發(fā)揮城市綠地、道路、建筑對雨水的吸收、蓄存和緩釋作用，有效改善城市內(nèi)澇，削減地表徑流，改善城市的生態(tài)環(huán)境[6]。
3海綿城市建設(shè)過程中應(yīng)注意的主要問題相對于國外而言，我國海綿城市建設(shè)起步較晚，目前處于試點(diǎn)階段[7]。但“海綿城市”的發(fā)展理念已成為新型城市價(jià)值轉(zhuǎn)型的重要標(biāo)志以及實(shí)現(xiàn)人與自然和諧共處的必經(jīng)之路。正因?yàn)槿绱?，在其發(fā)展過程中應(yīng)該注意以下幾個(gè)問題。
3.1海綿城市的建設(shè)要以保護(hù)城市生態(tài)系統(tǒng)為前提
雨水降落到地表以后，經(jīng)過截留、滲透、調(diào)蓄形成地表雨水徑流，最后流入?yún)R渠。其中，滲透過程和地表雨水徑流管理是核心問題，其影響因素為地表植被土壤和地面坡度大小。在提出海綿城市建設(shè)理念之前，城市規(guī)劃考慮更多的是用地功能，對于雨水主要考慮的是排泄，即地下管網(wǎng)基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)，而對于路面建設(shè)等，則是人為地割裂了雨水與地下的天然聯(lián)系。在城市開發(fā)過程當(dāng)中不透水的硬質(zhì)路面會(huì)導(dǎo)致徑流系數(shù)增加＼[8、9＼]，通常情況下，林地的徑流系數(shù)約為0.1～0.2，農(nóng)田地的徑流系數(shù)為0.5～0.6，城市的徑流系數(shù)一般為0.9～1.0。因此，降水到達(dá)地表后難以下滲，形成了地表徑流，造成了城市內(nèi)澇。海綿城市就是克服了以往的不足，將雨水利用的幾個(gè)基本功能綜合起來進(jìn)行考慮[10]。不過，在海綿城市建設(shè)過程中，對雨水的截留和調(diào)蓄設(shè)施是建設(shè)重點(diǎn)，在建設(shè)過程中，應(yīng)充分尊重自然環(huán)境變化規(guī)律，最大限度地保護(hù)城市生態(tài)系統(tǒng)[11]。
3.2海綿城市建設(shè)應(yīng)充分認(rèn)識南北方自然環(huán)境差異
南北方城市建設(shè)差異較大，在進(jìn)行海綿城市建設(shè)的過程當(dāng)中，需結(jié)合城市的地理環(huán)境因素，具體情況具體分析。從宏觀建設(shè)角度出發(fā)，南北方城市開發(fā)的著重點(diǎn)有所不同。對于北方城市來說，降雨量小，蒸發(fā)量大，如何存蓄更多的降水、并能及時(shí)地加以再利用是關(guān)鍵問題[10]。而南方城市因降雨量較大，河流、湖泊眾多，排洪量遠(yuǎn)小于降水積蓄量，造成了地表徑流，容易誘發(fā)城市內(nèi)澇。因此，在進(jìn)行海綿城市建設(shè)過程中應(yīng)該因地制宜，選擇合適的建設(shè)方案[12]。
3.3做好基礎(chǔ)性研究和合理規(guī)劃論證工作
對當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境、城建分區(qū)應(yīng)該注重基礎(chǔ)性的研究和合理規(guī)劃，這樣才能使海綿城市建設(shè)具有系統(tǒng)性、基礎(chǔ)性的準(zhǔn)備，也會(huì)讓海綿城市建設(shè)適應(yīng)當(dāng)?shù)氐淖匀画h(huán)境和社會(huì)發(fā)展的需要。很多城市都將海綿城市的建設(shè)納入城市基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)的范疇之內(nèi)，但是，如果海綿城市的規(guī)劃不合理，將會(huì)導(dǎo)致城市功能區(qū)混亂，綠色海綿設(shè)施之間無法協(xié)調(diào)，喪失了海綿的“彈性”功能。如果對當(dāng)?shù)刈匀坏乩砀艣r缺乏全面研究的話，更會(huì)使綠色海綿設(shè)施無法充分解決城市水體問題，嚴(yán)重的會(huì)使海綿城市建設(shè)徒勞一場。
4建議和對策
4.1大力提高城市的植被覆蓋率
海綿城市的建設(shè)過程中，應(yīng)大力提高城市的植被覆蓋率?；驹瓌t是城市生態(tài)建設(shè)和自然力的復(fù)原 ＼[8，11＼]。而傳統(tǒng)的城市發(fā)展理念強(qiáng)調(diào)城市的經(jīng)濟(jì)職能和社會(huì)職能，以“堅(jiān)固耐用、經(jīng)濟(jì)美觀”為原則，忽視了城市水體涵養(yǎng)功能和生態(tài)環(huán)境的作用，在建設(shè)中偏離了正確的發(fā)展模式。例如，硬質(zhì)的街道不利于雨水的下滲，不合理的溝渠開發(fā)，城市河道縮減，對湖泊等水體圍填侵占等。因此，建設(shè)海綿城市就需要增加綠化面積，從環(huán)境保護(hù)入手，改善城市生態(tài)系統(tǒng)[15]。地表綠化是對降水的就地直接吸納，這是發(fā)揮城市“海綿”功能的最重要的一步。海綿城市的建設(shè)不僅僅是一個(gè)工程問題，更是一個(gè)環(huán)境問題。從工程學(xué)的角度來看，工程手段可以提高對降水的利用率，而從城市生態(tài)環(huán)境保護(hù)的角度出發(fā)，才能從開發(fā)戰(zhàn)略、指導(dǎo)思想上徹底轉(zhuǎn)變思路，把海綿城市的建設(shè)當(dāng)作永久性的，戰(zhàn)略性的事業(yè)去發(fā)展＼[15、16＼]，總體來說就是要保證城市綠地的覆蓋面積并使其得以有效保護(hù)，例如江蘇省城區(qū)用地規(guī)劃就充分考慮了這些特點(diǎn)。
4.2重視地理環(huán)境要素，將蓄水和雨水再利用作為重點(diǎn)針對南北方差異問題：在北方進(jìn)行城市基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)時(shí)，應(yīng)將蓄水、降水再利用作為開發(fā)的重點(diǎn)。例如哈爾濱群力雨洪公園，就合理地解決了雨水的收集、調(diào)蓄、排泄，不僅合理利用了雨水資源，而且較好地解決了水污染問題。通過簡單的挖方和填方，緩解低洼地積水問題，實(shí)現(xiàn)高地與低地相結(jié)合，高地種植旱生植被、低地建設(shè)魚塘并種植喜濕植被，建設(shè)新穎的農(nóng)業(yè)景觀＼[17，18＼]，緩解雨洪壓力。此外，公園四周建造大小不一的水坑，收集城市降水，經(jīng)過自然匯集、過濾后在低洼地匯聚供給魚類飼養(yǎng)，將多余降水轉(zhuǎn)移到調(diào)蓄地區(qū)，尤其是城市污水，在向異地轉(zhuǎn)移過程中實(shí)現(xiàn)過濾和匯集來解決城市水污染問題＼[18，19＼]，建立發(fā)達(dá)的地下管渠，實(shí)現(xiàn)蓄水地區(qū)與城市之間水體的自由調(diào)動(dòng)。
對于南方城市建設(shè)而言，由于降水較多，應(yīng)采用降水就地吸納的方式，如貴州六盤水明湖濕地公園的建設(shè)理念就是典型代表，其核心是通過減緩城市排水速度來實(shí)現(xiàn)“海綿性”，傳統(tǒng)的城市排水排洪工程主要以快速排水為主，而新型海綿城市的建設(shè)打破了這一束縛，明湖濕地公園位于市區(qū)內(nèi)，通過恢復(fù)水城河兩岸的植被減少地表徑流，增加水體中的氧氣含量。種植各種植物，促使富營養(yǎng)化的水體被生物吸收，緩解城市水體污染，同時(shí)，建立梯田式濕地＼[20，21＼]，有效的減緩地表徑流、削減洪峰、調(diào)節(jié)季節(jié)性降雨和城區(qū)空氣質(zhì)量＼[22，23＼]。
4.3加強(qiáng)海綿城市建設(shè)的基礎(chǔ)性研究，完善相關(guān)政策
在海綿城市的建設(shè)之初，要對該城市自然地理概況做出分析，如城市地貌特征、降水量、地下水水情、地質(zhì)概況等，這也是海綿城市建設(shè)的基礎(chǔ)工作，具有海綿效應(yīng)的城市綠色設(shè)施，如對綠色屋頂、冠層截流、綠色街道、生態(tài)溝、雨水花園、蓄水池等建設(shè)做到心中有數(shù)。
在保障措施上，首先要制定相關(guān)的規(guī)章，出臺(tái)相應(yīng)的指導(dǎo)意見，引導(dǎo)各地區(qū)建設(shè)符合本地區(qū)的具有可操作性的建設(shè)方案，并將海綿城市建設(shè)納入法律體系，通過法律來保證海綿城市建設(shè)的落實(shí)和維護(hù)＼[15，24＼]。轉(zhuǎn)變城市發(fā)展的觀念，將城市發(fā)展和自然融為一體，劃分合理的城市功能，實(shí)現(xiàn)城市建筑、排水、水利工程等多方面的銜接＼[25，26＼]。
5結(jié)語
本文主要闡述了海綿城市的概況、提出背景以及國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀。探討在進(jìn)行海綿城市建設(shè)過程當(dāng)中應(yīng)該注意的幾個(gè)問問題，這些問題是不同角度、不同的發(fā)展階段對海綿城市建設(shè)的基本要求。影響海綿城市發(fā)展的問題主要為自然環(huán)境因素，明確自然環(huán)境與基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)之間的相互關(guān)系，可以促進(jìn)海綿城市的發(fā)展，實(shí)現(xiàn)人與自然的和諧共處。
參考文獻(xiàn)：
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【關(guān)鍵詞】 海綿城市 給排水建設(shè) 注意問題
隨著世界環(huán)境的逐漸惡化以及城市建設(shè)的需要，越來越多的城市開始建造海綿工程，提升城市應(yīng)對雨水的能力，留住雨水資源，為城市供水做出貢獻(xiàn)。但是，我國的海綿工程建設(shè)的能力還存在不足，建設(shè)過程中存在的問題較多，為此，本文結(jié)合筆者的工作經(jīng)驗(yàn)，闡述海綿城市給排水建設(shè)中需要注意的問題和相應(yīng)的建議，以期為我國的城市建設(shè)做出貢獻(xiàn)。
1 海綿城市給排水建設(shè)的意義
1.1 提高環(huán)境適應(yīng)能力
眾所周知，我國土地面積廣闊，既有較為干旱的西北地區(qū)，又包含雨水充足的沿海地區(qū)，同時(shí)，隨著氣候環(huán)境的不斷變化，我國城市大多會(huì)經(jīng)歷雨水的考驗(yàn)，當(dāng)雨水量較大時(shí)，城市的排水壓力會(huì)比較大，大多數(shù)城市會(huì)出現(xiàn)內(nèi)澇問題，為此必須要做好給排水建設(shè)工作，提升城市應(yīng)對風(fēng)險(xiǎn)的能力。我國目前開始建設(shè)海綿工程，其主要的作用是提升環(huán)境適應(yīng)能力，降低雨水的不良影響，保留雨水資源，利用防、排、蓄、滲、滯等方法，不但可以減少內(nèi)澇問題的產(chǎn)生，同時(shí)還可以有效提高水資源利用效率[1]。
1.2 恢復(fù)受損害水體
海綿工程的作用不僅在于提升環(huán)境適應(yīng)能力，其還能有效地恢復(fù)和凈化受損的水體，在海綿工程中，通過利用專業(yè)的技術(shù)和自然途徑，能夠?qū)⒆匀凰奶卣骶S持在城市開發(fā)前狀態(tài)，提高對城市原有生態(tài)系統(tǒng)的保護(hù)效率。海綿工程中的生態(tài)手段對粗放式城市建設(shè)環(huán)境進(jìn)行優(yōu)化，能夠恢復(fù)前期受損壞的水體，使其能夠降低污染程度，在海綿工程的給排水建設(shè)工作中，應(yīng)當(dāng)首先對城市的水體情況進(jìn)行細(xì)致的檢查，找出問題較為嚴(yán)重的區(qū)域，并集中加快海綿工程建設(shè)，提升水體的恢復(fù)速率，政府部門應(yīng)當(dāng)將海綿工程與其他的工程進(jìn)行聯(lián)合。
1.3 提高水資源利用率
由于客觀環(huán)境的限制，我國大多數(shù)地區(qū)處于缺水的狀態(tài)中，但是，我國城市建設(shè)正處在高速發(fā)展的階段，對水資源的需求非常強(qiáng)烈，如果僅靠地下水源，很難滿足發(fā)展的需要，為此，我國城市需要更多的水資源供應(yīng)渠道，保障城市建設(shè)順利進(jìn)行，其中，海綿工程能夠有效地提升水資源的利用率，讓水資源通過自然滲透、自然積存以及自然凈化等過程，重新被人們所利用，從而降低城市建設(shè)的成本，提高城市發(fā)展的速度。
2 海綿城市給排水建設(shè)存在的問題分析
2.1 依據(jù)科學(xué)性低
目前，我國在海綿城市的建設(shè)方面經(jīng)驗(yàn)較少，發(fā)展的思路主要來源于少數(shù)的科研單位和政府部門，因此導(dǎo)致我國海綿城市的科學(xué)性較差，這也導(dǎo)致我國海綿城市在運(yùn)營過程中出現(xiàn)諸多問題，水資源的利用效率并沒有明顯的提高。這說明，科學(xué)程度對海綿城市的建設(shè)尤為重要，每個(gè)城市在建設(shè)過程中，要結(jié)合自身城市的特點(diǎn)，做好給排水的規(guī)劃和方案，掌握各項(xiàng)建設(shè)指標(biāo)，尤其是要做好水量預(yù)測與水平衡分析。
2.2 排水體系不合理
雖然現(xiàn)如今我國城市的建設(shè)速度不斷加快，但是，我國城市發(fā)展的時(shí)間較短，發(fā)展的經(jīng)驗(yàn)相對不足，其中給排水建設(shè)工作一直為社會(huì)所詬病，例如我國大多數(shù)城市使用的雨水分流機(jī)制應(yīng)用效率非常低，尤其是在西北地區(qū)，雨水管道長時(shí)間閑置，而且雨水資源往往是直接排放到目的區(qū)域，造成資源嚴(yán)重浪費(fèi)。因此，我國的海綿城市應(yīng)當(dāng)避免上述問題，實(shí)現(xiàn)對雨水的分流儲(chǔ)存，使得雨水資源得到有效的利用[2]。
2.3 給排水體系影響大
我國的城市建設(shè)者已經(jīng)認(rèn)識到地下設(shè)施建設(shè)的必要性，隨著時(shí)代的發(fā)展，地下的構(gòu)筑物數(shù)量逐漸增加，城市的給排水系統(tǒng)更加優(yōu)化，但是其對城市的影響也隨之增大，同時(shí)現(xiàn)有供水管道長度、 質(zhì)量以及建設(shè)等方面均存在一定的不足，并不能完全滿足城市建設(shè)需求。因此，在海綿城市的建設(shè)過程中，應(yīng)當(dāng)對給排水系統(tǒng)的規(guī)劃設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化，降低其建設(shè)對已存自然水體系的影響。
3 對海綿城市給排水建設(shè)提出的建議
3.1 基于具體情況進(jìn)行給排水建設(shè)
我國土地面積廣闊，這也導(dǎo)致我國城市的具體情況各不相同，為此，在海綿城市的建設(shè)過程中，應(yīng)當(dāng)結(jié)合自身的實(shí)際情況，避免盲目地學(xué)習(xí)其他城市的成熟經(jīng)驗(yàn)，要做到因地制宜。例如濟(jì)南海綿工程中，其主要的海綿道路分布在城市的南邊，這是因?yàn)闈?jì)南以“泉城”而聞名，其需要雨水作為補(bǔ)充，而且濟(jì)南的南邊地勢較高，海綿工程中的水資源能夠逐漸滲透到泉水聚集區(qū)，從而滿足泉水噴涌的需要。
3.2 注重專業(yè)性技術(shù)方面的研究
海綿城市的給排水建設(shè)工作是城市基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)的重要內(nèi)容，為了提高建設(shè)的質(zhì)量，相關(guān)單位應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)專業(yè)性技術(shù)的研究，提升技術(shù)的科技水平，保證建設(shè)出的海綿工程具備較好的質(zhì)量，使用更長的時(shí)間，尤其是在海綿城市的建設(shè)目前處于初級階段，一定要一邊建設(shè)一邊摸索著前進(jìn)，無論是相關(guān)政策還是施工經(jīng)驗(yàn)均比較少，對系統(tǒng)設(shè)計(jì)提供的依據(jù)支持較低，因此具有很強(qiáng)的不確定性。
3.3 落實(shí)責(zé)任體系機(jī)制
海綿城市的建設(shè)過程比較漫長，而且我國在這方面的經(jīng)驗(yàn)較為缺乏，在建設(shè)工作中，一定要將責(zé)任進(jìn)行明確，落實(shí)責(zé)任體系機(jī)制，以現(xiàn)有的基礎(chǔ)設(shè)施為對象，對其進(jìn)行統(tǒng)籌分析、規(guī)劃與設(shè)計(jì)，提高各類基礎(chǔ)設(shè)施運(yùn)行的安全性，且滿足其與給排水系統(tǒng)協(xié)調(diào)運(yùn)行的要求。
總之，海綿城市是未來一段時(shí)間內(nèi)我國城市建設(shè)的主要方向，其中給排水工程是最為重要的建設(shè)內(nèi)容，每個(gè)城市在建設(shè)工作中，要立足自身的實(shí)際，以城市自身發(fā)展基礎(chǔ)為依據(jù)，統(tǒng)籌各項(xiàng)影響因素，提升海綿工程的技術(shù)水平，對其中的難點(diǎn)問題進(jìn)行有針對性的分析。通過海綿工程的建設(shè)，提高雨水資源的利用效率，為城市的健康發(fā)展提供建設(shè)的基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn)：
論文摘要 廓清醫(yī)療損害民事責(zé)任的構(gòu)成要件是研究醫(yī)療損害民事責(zé)任的前提和關(guān)鍵。而對于醫(yī)療損害，醫(yī)療機(jī)構(gòu)一般應(yīng)承擔(dān)民事賠償責(zé)任。但在一些特殊情況下，雖然患者有損害，卻可以免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的賠償責(zé)任。
論文關(guān)鍵詞 醫(yī)療損害民事責(zé)任 構(gòu)成要件 免責(zé)事由 侵權(quán)責(zé)任法 醫(yī)療事故處理?xiàng)l例
廓清醫(yī)療損害民事責(zé)任的構(gòu)成要件是進(jìn)一步研究醫(yī)療損害民事責(zé)任的前提和關(guān)鍵。而在醫(yī)療損害民事責(zé)任中，免責(zé)事由作為一種責(zé)任限制的制度設(shè)計(jì)，對于合理分配責(zé)任風(fēng)險(xiǎn)，，維護(hù)醫(yī)患雙方的利益平衡，實(shí)現(xiàn)公平正義具有重要作用。
一、醫(yī)療損害民事責(zé)任的成要件
這里所謂的構(gòu)成要件，是指構(gòu)成侵權(quán)應(yīng)當(dāng)承擔(dān)民事賠償責(zé)任的必要條件，這些條件必須同時(shí)具備。《侵權(quán)責(zé)任法》第五十四條規(guī)定：“患者在診療活動(dòng)中受到損害，醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員有過錯(cuò)的，由醫(yī)療機(jī)構(gòu)承擔(dān)賠償責(zé)任。”據(jù)此，醫(yī)療損害民事責(zé)任構(gòu)成要件可以概括如下：
1.患者損害事實(shí)的存在。民法上所指的損害，不僅包括物質(zhì)上的損失，也包括精神上的損失，即“民事權(quán)益受到侵害”。作為醫(yī)療損害是指患者在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的診療護(hù)理過程中，因醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的行為而給患者所造成的利益減少的不良后果，具體表現(xiàn)為患者的死亡、殘疾、增加病痛、延長治療時(shí)間等并由此所造成的財(cái)產(chǎn)上的減損及患者和家屬精神上的焦慮、憂愁、苦惱等實(shí)際損害。
值得一提的是，《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第4條將醫(yī)療事故分為四級，其中作為兜底條款而對其他造成患者人身損害情形加以涵蓋的第四級醫(yī)療事故界定為“造成患者明顯人身損害的其他后果的”，對應(yīng)《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第49條“不屬于醫(yī)療事故的，醫(yī)療機(jī)構(gòu)不承擔(dān)賠償責(zé)任”的規(guī)定，顯然該規(guī)定顯得過于苛刻。因?yàn)槲覈睹穹ㄍ▌t》規(guī)定，只要行為人的過錯(cuò)造成他人的人身損害，就需要承擔(dān)民事責(zé)任，并未限定這種傷害必須是“明顯”；此外，有時(shí)患者遭受了死亡、殘疾以及器官組織損傷導(dǎo)致功能障礙之外的其他人身損害的，雖然此種損害非常嚴(yán)重但需經(jīng)過一定的時(shí)間才能顯現(xiàn)出來，而依《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》卻可能構(gòu)不成醫(yī)療事故從而得不到相應(yīng)賠償。而《侵權(quán)責(zé)任法》將其修正為只要“患者在診療活動(dòng)中受到損害”，在醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員有過錯(cuò)的前提下，醫(yī)療機(jī)構(gòu)就將承擔(dān)賠償責(zé)任。很明顯，《侵權(quán)責(zé)任法》的規(guī)定對患者而言更加合理而人性化。
2.醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員有過錯(cuò)。這也是醫(yī)療主體承擔(dān)醫(yī)療損害責(zé)任的歸責(zé)原則和最終要件。法律概念里的過錯(cuò)包括故意和過失兩種形式，但在醫(yī)療損害民事責(zé)任中，醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過錯(cuò)只有過失一種形式，即在醫(yī)療損害民事責(zé)任中，患者的損害事實(shí)只能是由醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過失造成的。因?yàn)槿绻t(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員由于主觀故意造成患者損害后果的，就構(gòu)成了故意傷害或故意殺人，屬于刑事責(zé)任，應(yīng)由《刑法》來調(diào)整，當(dāng)不在醫(yī)療損害民事責(zé)任的范疇內(nèi)。醫(yī)療損害中的過失，包括疏忽大意的過失和過于自信的過失兩種。對于醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員主觀上是否有過失應(yīng)以其所應(yīng)盡的注意義務(wù)為標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也要綜合考慮醫(yī)療環(huán)境、醫(yī)療嘗試及醫(yī)學(xué)的發(fā)展現(xiàn)況。
在醫(yī)患關(guān)系中由于雙方所處地位關(guān)系的特殊性，醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員主觀上是否存在過錯(cuò)適用舉證責(zé)任倒置原則。同時(shí)《侵權(quán)責(zé)任法》又明確加以規(guī)定“因下列情形之一的，推定醫(yī)療機(jī)構(gòu)有過錯(cuò)：（一）違反法律、行政法規(guī)、規(guī)章以及其他有關(guān)診療規(guī)范的規(guī)定；（二）隱匿或者拒絕提供與糾紛有關(guān)的病歷資料；（三）偽造、篡改或者銷毀病歷資料。”
3.患者的損害事實(shí)與醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過錯(cuò)之間具有因果關(guān)系。醫(yī)療損害必須與醫(yī)療行為之間存在必然的因果關(guān)系，否則醫(yī)療行為便不存在損害事實(shí)。因果關(guān)系是確定醫(yī)療損害民事責(zé)任的必要條件之一，如果患者的損害事實(shí)與醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的主觀過錯(cuò)間沒有因果關(guān)系，那么醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員就不承擔(dān)民事賠償責(zé)任。
需要說明的是，這里的因果關(guān)系并非僅限定于直接因果關(guān)系。因?yàn)槿绻乐苯右蚬P(guān)系的要求，如果醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的行為是患者受損害的間接原因時(shí)，醫(yī)療機(jī)構(gòu)就無需承擔(dān)責(zé)任。這顯然是有失公平的。因?yàn)楸M管間接原因只是對結(jié)果的發(fā)生具有某種可能性，但其本身仍然屬于造成結(jié)果發(fā)生的原因之一，并非完全沒有關(guān)聯(lián)，況且直接原因與間接原因在一定條件與環(huán)境下還可以相互轉(zhuǎn)化。事實(shí)上，因果關(guān)系中既存在一因一果的的簡單情形，更大量存在一因多果、多因一果或多因多果等復(fù)雜情形。醫(yī)療損害本身就是患者自身體質(zhì)、醫(yī)學(xué)技術(shù)水平、醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的行為、法律的適用等多項(xiàng)復(fù)雜因素交錯(cuò)其中的問題，簡單地依據(jù)原因力去區(qū)分所謂的直接原因與間接原因很難做到。因此，只要醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過失行為與患者的損害結(jié)果之間有因果關(guān)系存在，就應(yīng)依法承擔(dān)相應(yīng)的民事責(zé)任。
一般而言，在醫(yī)療損害訴訟中，要證明患者在醫(yī)療過程中死亡、殘疾及其他損害后果較為容易，但要證明患者所受的損害后果是醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的醫(yī)療診治行為所致，即二者存在因果關(guān)系，對于一般患者而言，很難以證據(jù)證明。因此同是否具有醫(yī)療過錯(cuò)舉證責(zé)任一樣，對其也采取舉證責(zé)任倒置原則，即由醫(yī)療機(jī)構(gòu)證明其醫(yī)療行為與患者人身損害之間不存在因果關(guān)系。如醫(yī)療機(jī)構(gòu)舉證不能就應(yīng)認(rèn)定二者具有因果關(guān)系，醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)承擔(dān)損害賠償責(zé)任。對此，最高人民法院2001年12月公布的《最高人民法院關(guān)于民事訴訟證據(jù)的若干規(guī)定》第4條明確規(guī)定：“因醫(yī)療行為引起的侵權(quán)訴訟，由醫(yī)療機(jī)構(gòu)就醫(yī)療行為與損害后果之間不存在因果關(guān)系及不存在醫(yī)療過錯(cuò)承擔(dān)舉證責(zé)任?！?/p>
二、醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由
對于醫(yī)療損害，醫(yī)療機(jī)構(gòu)一般應(yīng)承擔(dān)民事賠償責(zé)任。但在一些特殊情況下，雖然患者有損害，醫(yī)療機(jī)構(gòu)卻可以免責(zé)。對此，《侵權(quán)責(zé)任法》和《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》都作出了相應(yīng)規(guī)定?！肚謾?quán)責(zé)任法》第60條明確規(guī)定：“患者有損害，因下列情形之一的，醫(yī)療機(jī)構(gòu)不承擔(dān)賠償責(zé)任：（一）患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行符合診療規(guī)范的診療；（二）醫(yī)務(wù)人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務(wù)；（三）限于當(dāng)時(shí)的醫(yī)療水平難以診療。前款第一項(xiàng)情形中，醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員也有過錯(cuò)的，應(yīng)當(dāng)承擔(dān)相應(yīng)的賠償責(zé)任?！薄肚謾?quán)責(zé)任法》在這里提到了三種情形下醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由。筆者認(rèn)為除此之外，《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第33條所規(guī)定的的六種不屬于醫(yī)療事故的情形，在一定條件下仍然可以作為醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由。事實(shí)上，《侵權(quán)責(zé)任法》第60條就是對《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第33條的第（五）、第（一）及第（三）項(xiàng)的進(jìn)一步完善。此外，依據(jù)相關(guān)法律法規(guī)，在特定情況下仍不乏醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由。在此，筆者一并作如下論述：
1.患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行符合診療規(guī)范的診療從而導(dǎo)致患者損害的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)?；颊叩结t(yī)療機(jī)構(gòu)就醫(yī)是患者的權(quán)利，同樣患者就醫(yī)后，配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行符合診療規(guī)范的、必要的醫(yī)學(xué)常規(guī)檢查及診治等診療活動(dòng)是患者及其近親屬的義務(wù)，這樣做的目的最終也符合患者的診療利益。但是，如果是由于患者及其近親屬的不予配合而延誤診療導(dǎo)致不良后果的，則患者的不良后果與醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員的行為之間沒有因果關(guān)系，醫(yī)療機(jī)構(gòu)對此損害不應(yīng)承擔(dān)賠償責(zé)任。這里所謂患者及其近親屬的不予配合是指其主觀上具有過錯(cuò)，具體表現(xiàn)為故意或過失行為。當(dāng)然如果醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員對這種不良后果的發(fā)生也有過錯(cuò)的，則不能完全免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的賠償責(zé)任，而只能適當(dāng)減輕賠償責(zé)任。此時(shí)應(yīng)依醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員在不良后果的產(chǎn)生中所起的作用（原因力的大?。﹣泶_定其相應(yīng)的賠償責(zé)任。
2.醫(yī)務(wù)人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務(wù)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)。對生命垂危急需搶救的患者而言，“時(shí)間就是生命”。這里所謂的“緊急情況”必須具備兩個(gè)構(gòu)成要件：其一是必須情況緊急，患者存在生命危險(xiǎn)，這種危險(xiǎn)迫在眉睫；其二是此時(shí)的緊急醫(yī)療措施應(yīng)當(dāng)是限于迫不得已，即當(dāng)時(shí)沒有任何其它更好的救助措施可以實(shí)施，醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員已經(jīng)盡到合理診療義務(wù)。反之，如果在救助的時(shí)候，明顯存在對患者來說可能更好的救助措施和方法，而醫(yī)務(wù)人員卻采用了給患者造成損害的醫(yī)療措施，即對這種損害的造成具有故意或重大過失，則醫(yī)療機(jī)構(gòu)當(dāng)然應(yīng)對患者的損害后果承擔(dān)相應(yīng)的責(zé)任。
3.限于當(dāng)時(shí)的醫(yī)療水平難以診療的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)。即在當(dāng)時(shí)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)條件下，發(fā)生無法預(yù)料或者不能防范的不良后果。從理論上講，醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)水平的發(fā)展是永遠(yuǎn)滯后于醫(yī)療實(shí)際需要的。因此，在醫(yī)療活動(dòng)中，由于受科學(xué)技術(shù)發(fā)展水平的限制，可能會(huì)發(fā)生無法預(yù)料或不能防范的不良后果，如并發(fā)癥、副作用等。這些不良后果是醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員在主觀上無法預(yù)料的，即使預(yù)料到了也不能預(yù)防，既主觀上無過失。
4.在醫(yī)療活動(dòng)中，由于患者病情異常或者患者體質(zhì)特殊而發(fā)生醫(yī)療意外的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)。因患者病情異常或者患者體質(zhì)特殊而發(fā)生了不良后果，是否免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的責(zé)任，不能一概而論。所謂構(gòu)成醫(yī)療意外的，是指這種不良后果必須是醫(yī)務(wù)人員難以預(yù)料和防范的，即醫(yī)務(wù)人員已盡到注意義務(wù)仍不能避免發(fā)生損害后果的才能免除責(zé)任。而如果醫(yī)務(wù)人員明知患者具有特殊體質(zhì)卻于治療中不加預(yù)防而導(dǎo)致不良后果的，則不能免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的責(zé)任，既不構(gòu)成醫(yī)療意外。
論文關(guān)鍵詞 醫(yī)療損害民事責(zé)任 構(gòu)成要件 免責(zé)事由 侵權(quán)責(zé)任法 醫(yī)療事故處理?xiàng)l例
廓清醫(yī)療損害民事責(zé)任的構(gòu)成要件是進(jìn)一步研究醫(yī)療損害民事責(zé)任的前提和關(guān)鍵。而在醫(yī)療損害民事責(zé)任中,免責(zé)事由作為一種責(zé)任限制的制度設(shè)計(jì),對于合理分配責(zé)任風(fēng)險(xiǎn),,維護(hù)醫(yī)患雙方的利益平衡,實(shí)現(xiàn)公平正義具有重要作用。
一、醫(yī)療損害民事責(zé)任的成要件
這里所謂的構(gòu)成要件,是指構(gòu)成侵權(quán)應(yīng)當(dāng)承擔(dān)民事賠償責(zé)任的必要條件,這些條件必須同時(shí)具備?！肚謾?quán)責(zé)任法》第五十四條規(guī)定:“患者在診療活動(dòng)中受到損害,醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員有過錯(cuò)的,由醫(yī)療機(jī)構(gòu)承擔(dān)賠償責(zé)任?！睋?jù)此,醫(yī)療損害民事責(zé)任構(gòu)成要件可以概括如下:
1.患者損害事實(shí)的存在。民法上所指的損害,不僅包括物質(zhì)上的損失,也包括精神上的損失,即“民事權(quán)益受到侵害”。作為醫(yī)療損害是指患者在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的診療護(hù)理過程中,因醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的行為而給患者所造成的利益減少的不良后果,具體表現(xiàn)為患者的死亡、殘疾、增加病痛、延長治療時(shí)間等并由此所造成的財(cái)產(chǎn)上的減損及患者和家屬精神上的焦慮、憂愁、苦惱等實(shí)際損害。
值得一提的是,《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第4條將醫(yī)療事故分為四級,其中作為兜底條款而對其他造成患者人身損害情形加以涵蓋的第四級醫(yī)療事故界定為“造成患者明顯人身損害的其他后果的”,對應(yīng)《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第49條“不屬于醫(yī)療事故的,醫(yī)療機(jī)構(gòu)不承擔(dān)賠償責(zé)任”的規(guī)定,顯然該規(guī)定顯得過于苛刻。因?yàn)槲覈睹穹ㄍ▌t》規(guī)定,只要行為人的過錯(cuò)造成他人的人身損害,就需要承擔(dān)民事責(zé)任,并未限定這種傷害必須是“明顯”;此外,有時(shí)患者遭受了死亡、殘疾以及器官組織損傷導(dǎo)致功能障礙之外的其他人身損害的,雖然此種損害非常嚴(yán)重但需經(jīng)過一定的時(shí)間才能顯現(xiàn)出來,而依《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》卻可能構(gòu)不成醫(yī)療事故從而得不到相應(yīng)賠償。而《侵權(quán)責(zé)任法》將其修正為只要“患者在診療活動(dòng)中受到損害”,在醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員有過錯(cuò)的前提下,醫(yī)療機(jī)構(gòu)就將承擔(dān)賠償責(zé)任。很明顯,《侵權(quán)責(zé)任法》的規(guī)定對患者而言更加合理而人性化。
2.醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員有過錯(cuò)。這也是醫(yī)療主體承擔(dān)醫(yī)療損害責(zé)任的歸責(zé)原則和最終要件。法律概念里的過錯(cuò)包括故意和過失兩種形式,但在醫(yī)療損害民事責(zé)任中,醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過錯(cuò)只有過失一種形式,即在醫(yī)療損害民事責(zé)任中,患者的損害事實(shí)只能是由醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過失造成的。因?yàn)槿绻t(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員由于主觀故意造成患者損害后果的,就構(gòu)成了故意傷害或故意殺人,屬于刑事責(zé)任,應(yīng)由《刑法》來調(diào)整,當(dāng)不在醫(yī)療損害民事責(zé)任的范疇內(nèi)。醫(yī)療損害中的過失,包括疏忽大意的過失和過于自信的過失兩種。對于醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員主觀上是否有過失應(yīng)以其所應(yīng)盡的注意義務(wù)為標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)也要綜合考慮醫(yī)療環(huán)境、醫(yī)療嘗試及醫(yī)學(xué)的發(fā)展現(xiàn)況。
在醫(yī)患關(guān)系中由于雙方所處地位關(guān)系的特殊性,醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員主觀上是否存在過錯(cuò)適用舉證責(zé)任倒置原則。同時(shí)《侵權(quán)責(zé)任法》又明確加以規(guī)定“因下列情形之一的,推定醫(yī)療機(jī)構(gòu)有過錯(cuò):(一)違反法律、行政法規(guī)、規(guī)章以及其他有關(guān)診療規(guī)范的規(guī)定;(二)隱匿或者拒絕提供與糾紛有關(guān)的病歷資料;(三)偽造、篡改或者銷毀病歷資料。”
3.患者的損害事實(shí)與醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過錯(cuò)之間具有因果關(guān)系。醫(yī)療損害必須與醫(yī)療行為之間存在必然的因果關(guān)系,否則醫(yī)療行為便不存在損害事實(shí)。因果關(guān)系是確定醫(yī)療損害民事責(zé)任的必要條件之一,如果患者的損害事實(shí)與醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的主觀過錯(cuò)間沒有因果關(guān)系,那么醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員就不承擔(dān)民事賠償責(zé)任。
需要說明的是,這里的因果關(guān)系并非僅限定于直接因果關(guān)系。因?yàn)槿绻乐苯右蚬P(guān)系的要求,如果醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的行為是患者受損害的間接原因時(shí),醫(yī)療機(jī)構(gòu)就無需承擔(dān)責(zé)任。這顯然是有失公平的。因?yàn)楸M管間接原因只是對結(jié)果的發(fā)生具有某種可能性,但其本身仍然屬于造成結(jié)果發(fā)生的原因之一,并非完全沒有關(guān)聯(lián),況且直接原因與間接原因在一定條件與環(huán)境下還可以相互轉(zhuǎn)化。事實(shí)上,因果關(guān)系中既存在一因一果的的簡單情形,更大量存在一因多果、多因一果或多因多果等復(fù)雜情形。醫(yī)療損害本身就是患者自身體質(zhì)、醫(yī)學(xué)技術(shù)水平、醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的行為、法律的適用等多項(xiàng)復(fù)雜因素交錯(cuò)其中的問題,簡單地依據(jù)原因力去區(qū)分所謂的直接原因與間接原因很難做到。因此,只要醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的過失行為與患者的損害結(jié)果之間有因果關(guān)系存在,就應(yīng)依法承擔(dān)相應(yīng)的民事責(zé)任。
一般而言,在醫(yī)療損害訴訟中,要證明患者在醫(yī)療過程中死亡、殘疾及其他損害后果較為容易,但要證明患者所受的損害后果是醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員的醫(yī)療診治行為所致,即二者存在因果關(guān)系,對于一般患者而言,很難以證據(jù)證明。因此同是否具有醫(yī)療過錯(cuò)舉證責(zé)任一樣,對其也采取舉證責(zé)任倒置原則,即由醫(yī)療機(jī)構(gòu)證明其醫(yī)療行為與患者人身損害之間不存在因果關(guān)系。如醫(yī)療機(jī)構(gòu)舉證不能就應(yīng)認(rèn)定二者具有因果關(guān)系,醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)承擔(dān)損害賠償責(zé)任。對此,最高人民法院2001年12月公布的《最高人民法院關(guān)于民事訴訟證據(jù)的若干規(guī)定》第4條明確規(guī)定:“因醫(yī)療行為引起的侵權(quán)訴訟,由醫(yī)療機(jī)構(gòu)就醫(yī)療行為與損害后果之間不存在因果關(guān)系及不存在醫(yī)療過錯(cuò)承擔(dān)舉證責(zé)任。”
二、醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由
對于醫(yī)療損害,醫(yī)療機(jī)構(gòu)一般應(yīng)承擔(dān)民事賠償責(zé)任。但在一些特殊情況下,雖然患者有損害,醫(yī)療機(jī)構(gòu)卻可以免責(zé)。對此,《侵權(quán)責(zé)任法》和《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》都作出了相應(yīng)規(guī)定。《侵權(quán)責(zé)任法》第60條明確規(guī)定:“患者有損害,因下列情形之一的,醫(yī)療機(jī)構(gòu)不承擔(dān)賠償責(zé)任:(一)患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行符合診療規(guī)范的診療;(二)醫(yī)務(wù)人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務(wù);(三)限于當(dāng)時(shí)的醫(yī)療水平難以診療。前款第一項(xiàng)情形中,醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員也有過錯(cuò)的,應(yīng)當(dāng)承擔(dān)相應(yīng)的賠償責(zé)任?！薄肚謾?quán)責(zé)任法》在這里提到了三種情形下醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由。筆者認(rèn)為除此之外,《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第33條所規(guī)定的的六種不屬于醫(yī)療事故的情形,在一定條件下仍然可以作為醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由。事實(shí)上,《侵權(quán)責(zé)任法》第60條就是對《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第33條的第(五)、第(一)及第(三)項(xiàng)的進(jìn)一步完善。此外,依據(jù)相關(guān)法律法規(guī),在特定情況下仍不乏醫(yī)療損害民事責(zé)任的免責(zé)事由。在此,筆者一并作如下論述:
1.患者或者其近親屬不配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行符合診療規(guī)范的診療從而導(dǎo)致患者損害的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)?；颊叩结t(yī)療機(jī)構(gòu)就醫(yī)是患者的權(quán)利,同樣患者就醫(yī)后,配合醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行符合診療規(guī)范的、必要的醫(yī)學(xué)常規(guī)檢查及診治等診療活動(dòng)是患者及其近親屬的義務(wù),這樣做的目的最終也符合患者的診療利益。但是,如果是由于患者及其近親屬的不予配合而延誤診療導(dǎo)致不良后果的,則患者的不良后果與醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員的行為之間沒有因果關(guān)系,醫(yī)療機(jī)構(gòu)對此損害不應(yīng)承擔(dān)賠償責(zé)任。這里所謂患者及其近親屬的不予配合是指其主觀上具有過錯(cuò),具體表現(xiàn)為故意或過失行為。當(dāng)然如果醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員對這種不良后果的發(fā)生也有過錯(cuò)的,則不能完全免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的賠償責(zé)任,而只能適當(dāng)減輕賠償責(zé)任。此時(shí)應(yīng)依醫(yī)療機(jī)構(gòu)及醫(yī)務(wù)人員在不良后果的產(chǎn)生中所起的作用(原因力的大小)來確定其相應(yīng)的賠償責(zé)任。
2.醫(yī)務(wù)人員在搶救生命垂危的患者等緊急情況下已經(jīng)盡到合理診療義務(wù)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)。對生命垂危急需搶救的患者而言,“時(shí)間就是生命”。這里所謂的“緊急情況”必須具備兩個(gè)構(gòu)成要件:其一是必須情況緊急,患者存在生命危險(xiǎn),這種危險(xiǎn)迫在眉睫;其二是此時(shí)的緊急醫(yī)療措施應(yīng)當(dāng)是限于迫不得已,即當(dāng)時(shí)沒有任何其它更好的救助措施可以實(shí)施,醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員已經(jīng)盡到合理診療義務(wù)。反之,如果在救助的時(shí)候,明顯存在對患者來說可能更好的救助措施和方法,而醫(yī)務(wù)人員卻采用了給患者造成損害的醫(yī)療措施,即對這種損害的造成具有故意或重大過失,則醫(yī)療機(jī)構(gòu)當(dāng)然應(yīng)對患者的損害后果承擔(dān)相應(yīng)的責(zé)任。
3.限于當(dāng)時(shí)的醫(yī)療水平難以診療的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)。即在當(dāng)時(shí)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)條件下,發(fā)生無法預(yù)料或者不能防范的不良后果。從理論上講,醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)水平的發(fā)展是永遠(yuǎn)滯后于醫(yī)療實(shí)際需要的。因此,在醫(yī)療活動(dòng)中,由于受科學(xué)技術(shù)發(fā)展水平的限制,可能會(huì)發(fā)生無法預(yù)料或不能防范的不良后果,如并發(fā)癥、副作用等。這些不良后果是醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其醫(yī)務(wù)人員在主觀上無法預(yù)料的,即使預(yù)料到了也不能預(yù)防,既主觀上無過失。
4.在醫(yī)療活動(dòng)中,由于患者病情異常或者患者體質(zhì)特殊而發(fā)生醫(yī)療意外的醫(yī)療機(jī)構(gòu)免責(zé)。因患者病情異?；蛘呋颊唧w質(zhì)特殊而發(fā)生了不良后果,是否免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的責(zé)任,不能一概而論。所謂構(gòu)成醫(yī)療意外的,是指這種不良后果必須是醫(yī)務(wù)人員難以預(yù)料和防范的,即醫(yī)務(wù)人員已盡到注意義務(wù)仍不能避免發(fā)生損害后果的才能免除責(zé)任。而如果醫(yī)務(wù)人員明知患者具有特殊體質(zhì)卻于治療中不加預(yù)防而導(dǎo)致不良后果的,則不能免除醫(yī)療機(jī)構(gòu)的責(zé)任,既不構(gòu)成醫(yī)療意外。
論文關(guān)鍵詞：北京私家園林,海綿城市,理水,風(fēng)景園林
經(jīng)實(shí)地考察與歷史資料匯總，總結(jié)了北京西郊八處私家園林的歷史演變和水系的景觀結(jié)構(gòu)。
1.1 北京市西郊私家園林歷史演變
承澤園，始建于雍正三年（1725），沒落于（1911），為清果親王允禮的園林；蔚秀園，始建時(shí)間不詳，最早記為載為道光十六年（1836），沒落于咸豐十年（I860），為清定郡王載銓的園林；淑春園，始建時(shí)間不詳，最早記載為康熙二十六年（1687），沒落于咸豐十年（1860），為清大臣和珅的宅園；鳴鶴園，始建時(shí)間不詳，最早記載為嘉慶七年（1802），于咸豐十年（1860）沒落，是清惠親王愉的宅園；鏡春園，始建時(shí)間不詳，最早記載為嘉慶七年（1802），于咸豐十年（1860）沒落，屬清莊靜公主；朗潤園，始建時(shí)間不詳，最早記載為嘉慶年間（1795）民國初年（1912）改建，屬清慶郡王瑤；勺園，始建于萬歷40年（1612）至42年（1614）年間，咸牟十年（1860）沒落，屬明官員米萬鐘；治貝子園，始建時(shí)間不詳，最早記載為光緒中葉（1871-1908），宣統(tǒng)八年（1916）沒落，屬淸貝子載治。
1.2 北京市西郊私家園林水系結(jié)構(gòu)
承澤園在昆明湖二龍閘出水口和萬泉河的匯合之處，園內(nèi)從西向東有兩條河縱貫全園。蔚秀園從南引萬泉河水入園，全園湖面約十余處，大小形狀各不相同，形成回環(huán)水系。淑春園屬原永定河的古河道，以“水”為脈，全園都分局著分散的水面，水景變化多端。鳴鶴園的水面富于變化，東側(cè)較規(guī)則有序，西側(cè)相較更為自由活潑，顯示了傳統(tǒng)園林的多層次變化。鏡春園建筑位于中央，四周湖水圍繞，全園觀景以靜觀為主，動(dòng)觀輔之。朗潤園布局則為曲水和土山環(huán)繞全園，中心形成一島，建筑集中修剪于島上，四面臨水。勺園景觀以水景為主，水面或堤橋分隔，或環(huán)水而筑，形成許多不同水景空間。治貝子園設(shè)置轆車盧轉(zhuǎn)井，通過這種工程向石槽注水，形成“曲水流觴”之美景。
2 北京市西郊私家園林的理水藝術(shù)
楊鴻勛先生在《江南園林論》中總結(jié)傳統(tǒng)園林理水藝術(shù)，有池塘、湖泊、溪流、江河、濠濮、泉水等類型[1]。北京私家園林的水景可歸入以上類型之中。
2.1 池塘型水系
池塘型水系是簡單的水池，多為長方形，顯出人工氣息和靜謐氛圍。如半畝園早先的方池，寸園內(nèi)形如硯臺(tái)的小池“硯沼”都是屬于這一類型。再如鳴鶴園和蔚秀園中都設(shè)有獨(dú)立的金魚池。另外，許多的京城宅園的設(shè)計(jì)中常在庭院內(nèi)設(shè)一“月牙河”，形狀似彎月，如崇禮宅園、馬家花園等。
2.2 湖泊型水系
湖泊型的水系在北京私園中也經(jīng)常出現(xiàn)，其大小各不相等。但無論大小，其岸大多都是曲折蜿蜒，且多為疊石形成駁岸。湖泊型的水系經(jīng)常做源頭和尾流以及水灣等部位，同時(shí)在端頭架設(shè)小橋，形成更豐富的層次，如可園、那家花園、蓮園等。大湖當(dāng)中還要設(shè)置島嶼、長堤、水灘，從而形成更為豐富的景深，小學(xué)德育論文如淑春園、鳴鶴園，都是富有自然流轉(zhuǎn)之意的。同時(shí)，與中國自然地形的呼應(yīng)，北京園林的水系流向也經(jīng)常是以西北為源頭，流向東南的。
2.3 溪流型水系
溪流即蜿蜒的較狹窄的河道，許多花園都用它繞假山、亭榭，增加趣味。如藏園東部就有溪流潺潺而下，再如意園內(nèi)也有小溪曲折縈繞。清華園、達(dá)園均設(shè)長溪流經(jīng)全園，以此彰顯水脈漫長，源源不盡。
2.4 濠濮型水系
濠濮型的水系可概括為兩側(cè)山巒疊石夾一水的形態(tài)。京郊規(guī)模較大的私家園林，如勺園、清華園、自怡園、朗潤園、蔚秀園等，擁有變化繁復(fù)的水景，可泛舟游覽。園中之水與人工假山通常互相倚靠，相輔相成。山水的關(guān)系最常見的有兩種，一種是山與水彼此獨(dú)立，疊石位于水池的盡頭，山體走勢與水的流向垂直，并與主建筑遙遙相對，形成“遠(yuǎn)山”的效果，如張伯駒的似園。另一種是山水彼此平行展開，咫尺相望，似有無盡之感，如清代西郊清華園北部山池、 民國禮士胡同李家花園后院石池等[2]。
3 對海綿城市建設(shè)的啟示
3.1 功能完善的水系統(tǒng)
小水系聯(lián)合形成大水系，大水系之間再聯(lián)合形成更大的水網(wǎng)。在整個(gè)體系中，每一個(gè)私家園林就像是組織，其中的各個(gè)水面就像是細(xì)胞，而三山五園地區(qū)就像是器官，整個(gè)城市就像是個(gè)體。細(xì)胞組成組織，組織形成器官，器官又組成人體。由此可見，要實(shí)現(xiàn)海綿城市，就要一步一步細(xì)化，將整個(gè)城市的“吸水”落實(shí)到每一個(gè)雨水花園細(xì)胞的“吸水”。完整的水網(wǎng)結(jié)構(gòu)建立之后，還要求水體有完善的功能。城市的低洼地，可以學(xué)習(xí)古典園林，就近收集滯留雨水。同時(shí)人工修建的排水溝渠是地面上的排水系統(tǒng)，保證雨水就近排放。城外的自然大河可為城市提供充足的水源，與大海相連的，則可以調(diào)控整個(gè)城市的水量。在整個(gè)過程中，暗溝主要用于人口密集的區(qū)域，大多在雨洪排放的起始段設(shè)置，路邊的排水溝渠相互勾連，引導(dǎo)雨水進(jìn)入城內(nèi)的排水河道。這些河道應(yīng)具有較強(qiáng)的蓄水作用，足以抵御暴雨徑流所帶來的威脅。
3.2 富有詩意的景觀
在中國傳營造中，雨水基設(shè)施的功能、形式與文化相得益彰，是傳統(tǒng)文化價(jià)值取向的表現(xiàn)[3]。北京西郊的私家園林，是園林，也是水網(wǎng)系統(tǒng)，擔(dān)任著北京市水源地這一角色，其主要功能在于蓄水，大到城市當(dāng)中的主要蓄水區(qū)，小到一個(gè)雨水花園的蓄水區(qū)，都可以在進(jìn)行借鑒。在滿足工程目的的同時(shí)，融入設(shè)計(jì)師的思考，使海綿城市上升一個(gè)層次，成為山水城市。同時(shí)不應(yīng)盲目的挖湖堆山，大興土木，違背園林的初衷。
4 總結(jié)
海綿城市建設(shè)，應(yīng)先分析自然水文變化過程，通過對水系的完整規(guī)劃整理，保證水系網(wǎng)絡(luò)完整性和水體功能的完善度。在滿足水域的面積，河網(wǎng)的密度的同時(shí)營造兼有游賞和調(diào)蓄雨洪雙重功能的城市空間。城市園林綠地應(yīng)在改善城市環(huán)境條件的同時(shí)形成富有詩意的綠地景觀，構(gòu)建山水城市特色人居環(huán)境。孟兆禎院士說，園林建設(shè)是“從來多古意，可以賦新詩。”[4]在海綿城市建設(shè)的背景下，我們應(yīng)借鑒古代北京城市水系規(guī)劃與建設(shè)的優(yōu)秀經(jīng)驗(yàn)，變管網(wǎng)排水系統(tǒng)為綜合治理。增加水道、濕地的面積，恢復(fù)河網(wǎng)的生態(tài)功能。建設(shè)以水定城，注重景觀，水與綠相互結(jié)合的海綿城市。
【參考文獻(xiàn)】
[1]楊鴻勛.江南園林論[M].上海：上海人民出版社，1994.
近年來以芽袍衣殼蛋白為分子載體，通過芽袍表而展示技術(shù)將外源目的蛋白展示在重組枯草芽袍桿菌芽袍表而，制備具有生物活性的重組芽袍抗體和酶制劑已成為人們研究和關(guān)注的熱點(diǎn)。芽袍的結(jié)構(gòu)相當(dāng)復(fù)雜，中心部位為核芯，含有原生質(zhì)體，被芽袍膜包裹；核芯外而為皮層，成分為肚聚糖，再往外是一層或者數(shù)層蛋白質(zhì)組成的芽袍殼，最表而為芽袍壁。B. subhfis芽袍中約包含25種衣殼蛋白，而本研究前期已利用CotC為載體成功將海藻糖合酶展示在芽袍表而。但是由于芽袍易受萌發(fā)劑刺激而萌發(fā)，當(dāng)芽袍萌發(fā)時(shí)首先會(huì)釋放2,6-毗咤一梭酸鈣CCaz+-dipicolinicacid Caz+-DPA)和大量離子，然后袍子皮層內(nèi)的肚聚糖被水解，皮層水解會(huì)逐漸補(bǔ)充袍子核內(nèi)的水分，最后芽袍恢復(fù)酶活力，導(dǎo)致衣殼蛋白被降解脫落，而海藻糖合酶相應(yīng)脫落后也會(huì)被一些蛋白酶類降解，因此不僅失去了固定化酶的目的，還降低了海藻糖合酶酶活，加大其回收難度。所以，弱化芽袍萌發(fā)，鈍化芽袍對外界環(huán)境刺激的感知變得尤為重要。本研究選擇枯草芽袍桿菌芽袍萌發(fā)中的兩個(gè)關(guān)鍵皮層溶解酶基因cwlJ和、IeB基因作為敲除對象，實(shí)現(xiàn)抑制芽袍萌發(fā)的目的，構(gòu)建芽袍表而穩(wěn)定展示海藻糖合酶的工程菌，提高芽袍的穩(wěn)定性和利用率，更加高效穩(wěn)定的表而展示海藻糖合酶。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
含有海藻糖合酶基因的枯草芽袍桿菌168(以下簡稱B. subtifis 168-Tres):本實(shí)驗(yàn)室保藏；含有卡那霉素抗性基因的質(zhì)柳PIC9研口含有博來霉素抗性基因的質(zhì)粒pPICZaA:杭州寶賽生物科技有限公司；限制性內(nèi)切酶:日本TakaRa寶生物公司；卡那霉素、博來霉素、Ezup柱式基因組DNA抽提試劑盒、SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒:上海生工生物工程有限公司；高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒:艾德萊生物公司；其他試劑均屬于國產(chǎn)分析純。實(shí)驗(yàn)所涉及引物見表1所示。
LB培養(yǎng)基:酵母浸粉5 g/L、蛋白胨10 g/L,氯化鈉10 g/L,pH 7.0-7.4 。
發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖10 g/L、玉米漿10 g/L,酵4浸粉3 g/L, NaCI 6 g/L, K2HP04 3 g/L, MnS04 0.3 g/L, MgS042.4 g/L, pH7.0-7.4 。
菌體增殖培養(yǎng)基:酵母浸粉5 g/L、蛋白陳10 g/L,氯化鈉10 g/L、山梨醇91 g/L o
電轉(zhuǎn)緩沖液:甘露醇91 g/L、山梨醇91 g/L、甘油100 g/10
菌體復(fù)蘇培養(yǎng)基:酵母浸粉5 g/L、蛋白陳10 g/L,氯化鈉10 g/L、甘露醇69 g/L、山梨醇91 g/L。
葡萄糖需在高壓蒸汽滅菌鍋中115℃滅菌20 min其他培養(yǎng)基均121 ℃滅菌20 min。
1.2 儀器與設(shè)備
SW – CJ - 2FD型雙人單而凈化工作臺(tái):蘇州凈化設(shè)備有限公司；WFJ 7200型可見分光光度計(jì):尤尼柯(上海)儀器有限公司；5 804 R型離心機(jī):德國Eppendorf公司；438℃型電轉(zhuǎn)儀:德國Eppendorf公司；GNP - 9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱:上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；梯度PCR儀:美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司；MD2000核酸超微量分光光度計(jì):美國BioFuture公司；ZQYZ - CS型恒溫振蕩培養(yǎng)箱:上海知楚儀器有限公司。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1重組同源性片段sleBl-kmr, cwIJ1-zeor的制備
用Ezup柱式基因組DNA抽提試劑盒提取B. subtilis168-Tres菌體的脫氧核糖核酸(deoxyribose nucleic acidDNA)，并以此為模板，sleB F1和sleB R1為引物進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymerise chain reaction PCR)擴(kuò)增，獲得長度為592 bp用于敲除sleB基因的同源臂sleBl；使用高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒提取pPIC9k質(zhì)粒，以此為模板，sleB F2和sleB R2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得長度為1 502 bp的卡那霉素抗性基因片段km`；使用SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒膠回收所得的sleB 1片段與kmr片段為模板，sleB F1和sleB R2為引物進(jìn)行重疊延伸PCR， PCR擴(kuò)增條件為:（1）95 ℃預(yù)變性5 min； 94 ℃變性30 sec, 57 ℃退火30s，72℃延伸3.5 min， 5個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸2 min； （2） 95 ℃預(yù)變性5 min94 ℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸4.5 min, 30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min ， 4℃保存，擴(kuò)增得到長度為2 094 bp的同源重組片段sleBl -kmr，并使用SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒進(jìn)行膠回收，保存于-20℃?zhèn)溆?。cwlJl長度為451 bp博來霉素抗性基因片段為1 205 bp，cwlJl-zeor片段制備方法同上。Bacillus subtifis 168-TresOsleBΔcwIJ工程菌構(gòu)建流程見圖1。
1.3.2 回收產(chǎn)物的酶切及濃縮
用限制性內(nèi)切酶BamH I酶切sleB 1-kmr和 cwLll -zeor基因片段，并向酶切產(chǎn)物中加入1/10體積3 mol/L醋酸鈉和2.5倍體積的無水乙醇，置于-20℃冰箱冷卻20 min，然后12 000 r/min離心5 min得沉淀；加入300 μL體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇重懸沉淀，12 000 r/min離心5 min后除去乙醇,37℃風(fēng)干30 min最后加入15-20 μLddHZO重懸DNA。使用核酸超微量分光光度計(jì)測定回收DNA質(zhì)量濃度，并最終獲得質(zhì)量濃度在200-500 ng/μL之間的DNA溶液。
1.3.3 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備
挑取新鮮LB固體培養(yǎng)基表而的B. subtifis 168-Tres單菌落，接種于10 mL菌體增殖培養(yǎng)基中，37 ℃,220 r/min培養(yǎng)12h；將上述菌液轉(zhuǎn)接到50 mL菌體增殖培養(yǎng)基中至菌液初始OD600mm = 0.2，然后37 ℃,220 r/min培養(yǎng)菌體至OD600mm = 1.0；將菌液轉(zhuǎn)移到100 mL離心管，冰浴10--15 min后，4 ℃ ,8 000 r/min離心5 min，收集菌體；離心后的菌體用預(yù)冷的電轉(zhuǎn)緩沖液洗滌2--3次，并使用1 mL電轉(zhuǎn)緩沖液重懸菌體，制成枯草芽袍桿菌電轉(zhuǎn)化感受態(tài)[mo；將制備好的感受態(tài)細(xì)胞每管分裝100 μL，-80℃保存?zhèn)溆谩. subtilis 168-TresasleB感受態(tài)的制備方法同上。
1.3.4 電轉(zhuǎn)化
將回收片段sleBl-kmr與B. subtifis 168-Tres感受態(tài)混合均勻，然后加到2 mm電轉(zhuǎn)杯中預(yù)冷5 min，并使用電轉(zhuǎn)儀在2 000 V,5 ms條件下電轉(zhuǎn)化，電轉(zhuǎn)完成后立即加入500 μL菌體復(fù)蘇培養(yǎng)基，37 ℃,180 r/min復(fù)蘇培養(yǎng)3h后涂布在含卡那霉素(25 μg/mL)的LB 固體培養(yǎng)基中，于3 7 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2 d，篩選出抗卡那霉素的菌株。將cwlJl-zeor與B. subtifis 168-TresΔsleB感受態(tài)電轉(zhuǎn)后，篩選出抗卡那霉素和博來霉素的菌株。
1.3.5 陽性重組菌株的鑒定及傳代培養(yǎng)
挑取陽性轉(zhuǎn)化子接種到含卡那霉素抗性的液體LB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)過夜后8 000 r/min離心并收集菌體，提取重組菌DNA，并以獲得的基因組為模板，sleB FZ和sleB凡為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)PCR產(chǎn)物，獲得陽性重組菌株B. subtilis 168-TresΔsleBo重組菌B. subtilis168-TresΔsleBΔcwIJ的獲得方法同上。用LB液體培養(yǎng)基將B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在3 7 ℃ , 200 r/min的培養(yǎng)條件下傳代15次，做菌落PCR驗(yàn)證。
1.3.6 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌芽抱形成檢測
將原始菌株B. subtilis 168-Tre對口重組菌株B. subtilis168-TresΔsleBΔcwIJ以1%的接種量分別接種在發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于37 ℃ , 200 r/min的恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,每隔4h取樣，同時(shí)利用芽袍染色法對芽袍染色，置油鏡觀察，芽袍呈綠色，菌體成紅色。觀察10個(gè)視野的營養(yǎng)細(xì)菌與芽袍數(shù)，產(chǎn)芽袍率=芽袍數(shù)/(芽袍數(shù)+營養(yǎng)細(xì)胞數(shù))x100%。
1.3.7 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在LB培養(yǎng)基中芽抱萌發(fā)驗(yàn)證
分別將發(fā)酵48 h后的重組菌與原始菌菌液80℃水浴20 min，立即冰浴，將菌體稀釋后涂布在LB固體培養(yǎng)基中，放置在37 ℃'恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 h，用平板計(jì)數(shù)法記錄芽袍萌發(fā)結(jié)果。
1.3.8 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉(zhuǎn)化體系中芽抱萌發(fā)驗(yàn)證
分別取5 mL發(fā)酵48 h后的重組菌與原始菌菌液80 ℃水浴20 min，立即冰浴，與10 mL pH 7.5的磷酸鹽緩沖液配制的終濃度30%的麥芽糖漿混勻后制備成海藻糖合酶的反應(yīng)體系。將此反應(yīng)體系置于25 ℃恒溫水浴振蕩搖床中反應(yīng)12h，每隔4h取樣涂布在LB培養(yǎng)基中，放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 h，用平板計(jì)數(shù)法記錄芽袍萌發(fā)結(jié)果。
1.3.9 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉(zhuǎn)化體系中海藻糖合酶酶活檢測
分別將發(fā)酵48 h后的重組菌與原始菌發(fā)酵液8 000 r/min離心20 min，棄上清，用去離子水洗滌沉淀2次后并懸浮，加入溶菌酶使其終質(zhì)量濃度為2 mg/mL后T-37℃放置30 min破壞營養(yǎng)細(xì)胞，后經(jīng)8 000 r/min離心10 min，烘干，稱量干菌體質(zhì)量，最后用去離子水懸浮制得芽袍懸浮液，將5 mL芽袍懸浮液與10 mL pH 7.5的磷酸鹽緩沖液配制的終濃度為30%的麥芽糖漿混勻，制備成海藻糖合酶的反應(yīng)體系。將此反應(yīng)體系置于25 ℃'恒溫水浴振蕩搖床中反應(yīng)12h后，室溫，1 000 r/min離心10 min取上清進(jìn)行高效液相色譜Chigh performance liquid chromatography HPLC)檢測轉(zhuǎn)化體系中海藻糖。
HPLC測定色譜條件:Hypersil NHZ色譜柱(300 mmx4.6 mm 、5 μm)；流動(dòng)相(乙睛冰=3:1，V/功；流速1.0 mL/min；示差折光檢測器:波}}589.3nm；進(jìn)樣量10 μL；柱溫:40℃。
海藻糖合酶活力定義:在25 ℃ , pH 7.5條件下，每分鐘生成1 μmol海藻糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位(U)。
2結(jié)果與分析
2.1基因敲除片段sleB 1-kmrb勺構(gòu)建、電轉(zhuǎn)化及鑒定
以B. subtilis 168-Tres菌體的基因組為模板，sleB F,和sleB R,為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果見圖2a。由圖2a可知，在600 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度5 92 bp相符，表明已成功獲得同源臂sleBl；以質(zhì)粒pPIC9k為模板，sleB F2和sleB R2為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果見圖2b。由圖2b可知，在1 500 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度1 502 bp相符，表明成功獲得卡那霉素抗性基因片段kmr；以膠回收制得的sleBl片段與kmr片段為模板，sleB F,和sleB R2為引物進(jìn)行重疊延伸PCR，得基因敲除片段sleBl-kmr, 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，結(jié)果見圖2c。由圖2c可知，在2 000 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度2 094 bp相符，表明基因敲除片段sleBl -kmr構(gòu)建成功。
通過乙醇沉淀法濃縮酶切片段后，測得DNA質(zhì)量濃度為395.63 ng/μL。將10 μL回收片段與100 N.,L B. subtifis168-Tres感受態(tài)細(xì)胞混合并電轉(zhuǎn)，用引物sleB F2和sleB R2對含卡那霉素平板上生長的菌落基因組進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖2d所示，表明sleBl-kmr與sleB發(fā)生同源重組，完成sleB基因的敲除，獲得B. subtifis 168-TresΔsleB重組菌。
2.2基因敲除片段cwlJl-zeor的構(gòu)建、電轉(zhuǎn)化及鑒定
以B. subtilis 168-Tres菌體的基因組為模板，cw1J F1和cw1J R1為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果見圖3a。由圖3a可知，在500 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長451 bp相符，表明已成功獲得同源臂cwlJl；以質(zhì)粒pPICZaA為模板，使用引物cw1J F2和cw1J R2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果見圖3b。由圖3b可知，在1200 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度1 205 bp相符，表明成功獲得博來霉素抗性基因片段zeor；以膠回收制得的cwlJl片段和zeor片段為模板，cw1J F1和cw1J R2為引物進(jìn)行重疊延伸PCR，得基因敲除片段cwlJl-zeor, 1%瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)結(jié)果見圖3c。由圖3c可知，PCR產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)在1 700 bp左右出現(xiàn)特異性條帶，與理論長度1 656 bp相符，表明基因敲除片段cwlJl-zeor構(gòu)建成功。
通過乙醇沉淀法濃縮酶切片段后，測得DNA質(zhì)量濃度為378.26 ng/μL。將10 μL回收片段與100 N.,L B. subtilis168-TresasleB感受態(tài)細(xì)胞混合并電轉(zhuǎn)，用引物cw1J F2和cw1J凡對含km和zeo平板上生長的菌落基因組進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖3d所示，表明cwLll-zeor與cwlJ發(fā)生同源重組，完成cwlJ纂因的敲除，獲得B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌。
2.3 B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌傳代培養(yǎng)驗(yàn)證結(jié)果
B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌第5,10,15次傳代后的菌落PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果見圖40由圖4可知，第5,10,15次傳代在1 500 bp和1 200 bp都有條帶產(chǎn)生，與Icm和zeor的理論值相符，表明重組菌的遺傳穩(wěn)定性并未發(fā)生變化。
2.4 sleB, cwlJ基因雙敲除后對芽袍形成的影響
通過顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)算原始菌株B. subtilis 168-Tres與重組菌B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ芽袍率，結(jié)果見圖5.由圖5可知，重組菌株比原始菌株生長遲緩約4 h,但兩株菌在48 h后的芽袍形成率都約為88%，證明敲除sleB和cwlJ基因后會(huì)使菌體生長時(shí)間延遲，但芽袍形成率未發(fā)生變化。
2.5 B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在LB培養(yǎng)基中芽袍萌發(fā)驗(yàn)證
通過平板計(jì)數(shù)法對原始菌株和重組菌株芽袍萌況進(jìn)行比較，結(jié)果見圖6。由圖6可知，B. subtifis 168-Tres芽袍萌發(fā)數(shù)為4.9x10 CFU/mL, B. subtifis 168-TresΔsleB芽袍萌發(fā)數(shù)為5.3 x104 CFU/mL, B. subtilis 168-TresΔcwlJ芽袍萌發(fā)數(shù)為2.1x107 CFU/mL, B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ芽袍未見萌發(fā)。
2.6 B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉(zhuǎn)化體系中芽袍萌發(fā)驗(yàn)證
通過平板計(jì)數(shù)法對原始菌株B. subtifis 168-Tres和重組菌株B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ在麥芽糖轉(zhuǎn)化體系中的芽袍萌況進(jìn)行比較，結(jié)果見圖7。由圖7可知，原始菌株在麥芽糖轉(zhuǎn)化體系中轉(zhuǎn)化4h,8h,12h,16h后的芽袍萌發(fā)數(shù)都為4.8x108CFU/mL左右，而重組菌株芽袍在各個(gè)時(shí)段一直未見萌發(fā)。
2.7 B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌在麥芽糖轉(zhuǎn)化體系中海藻糖合酶酶活檢測
為了證實(shí)B. subtifis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌海藻糖合酶酶活是否有所提高，利用HPLC對重組菌芽袍懸浮液進(jìn)行海藻糖合酶檢測，結(jié)果見圖8。由圖8可知，用B. subtifis168-Tres原始菌芽袍轉(zhuǎn)化測得的海藻糖合酶酶活為5.83 U}用B. subtilis 168-TresΔsleBΔcwIJ重組菌芽袍轉(zhuǎn)化測得的海藻糖合酶酶活為10.42 U}重組菌比原始菌酶活提高了78.7%，這表明敲除、IeB和cwlJ基因后弱化了芽袍萌發(fā)，成功提高了芽袍表而展示海藻糖合酶的穩(wěn)定性。
3 結(jié)論
