序論：在您撰寫免疫管理論文時(shí)，參考他人的優(yōu)秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，引導(dǎo)您走向新的創(chuàng)作高度。

第1篇

全市20個(gè)接種單位均有通過網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)下載異地兒童接種信息，異地下載使用覆蓋率100％。全市下載異地兒童25097人，占全市建檔兒童數(shù)的7．5％，其中異地遷入兒童占76．6％，臨時(shí)接種占23．4％。2．5短信功能使用情況2012年8月免疫規(guī)劃平臺(tái)短信功能開通，至2013年12月31日，全市接種單位共發(fā)送預(yù)約和漏種催種短信2748次，合計(jì)64446條。

2討論

國(guó)家兒童預(yù)防接種信息管理系統(tǒng)的建設(shè)，實(shí)現(xiàn)了兒童預(yù)防接種信息管理由傳統(tǒng)的手工管理模式向計(jì)算機(jī)信息化管理的轉(zhuǎn)變；而福建省免疫規(guī)劃管理平臺(tái)的建立則實(shí)現(xiàn)了網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)交換，信息共享，是免疫規(guī)劃管理信息化的又一里程碑。分析2005—2013年全市建檔情況，省市內(nèi)流動(dòng)兒童占全市建檔兒童數(shù)的68．4％，其中44．8％為外市進(jìn)入本市，23．6％為本市內(nèi)變更接種點(diǎn)?？梢娒庖咭?guī)劃信息管理網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)的建設(shè)適時(shí)解決了接種對(duì)象流動(dòng)性大的難題。全市30d及時(shí)建檔率低，平均僅18．2％，無法保證預(yù)防接種特別是流動(dòng)兒童接種的順利接種。原因除因系統(tǒng)未與產(chǎn)科對(duì)接，首針接種后未立即建檔外，部分接種登記人員對(duì)系統(tǒng)操作不熟悉，習(xí)慣采用現(xiàn)場(chǎng)手工登記在冊(cè)，過后再重新錄入系統(tǒng)有關(guān)。分析顯示，全市接種單位兒童個(gè)案上傳及時(shí)率為100％，但上傳成功率僅84．5％，主要是部分單位的個(gè)案因未聯(lián)網(wǎng)而進(jìn)行多個(gè)系統(tǒng)同時(shí)錄入，使得內(nèi)部個(gè)案編碼重復(fù)以致無法上傳。上傳的在冊(cè)兒童個(gè)案中，暫住兒童和流動(dòng)兒童占我市接種兒童的3／5，為主要接種人群。且2007—2011年兒童數(shù)呈平穩(wěn)走勢(shì)，基本處于9年平均值上下（圖1），說明在國(guó)家服務(wù)器關(guān)閉后，各接種單位仍堅(jiān)持在信息系統(tǒng)錄入，2005—2006年的數(shù)據(jù)因補(bǔ)錄不全以致兒童數(shù)未達(dá)到平均水平。2012—2013年兒童個(gè)案總數(shù)明顯高于平均水平，2012年增幅達(dá)39．8％，得益于我省建立了居民健康信息系統(tǒng)免疫規(guī)劃管理子系統(tǒng)，省內(nèi)各接種單位實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)共享，提高了接種人員的建卡積極性，而便利的異地下載功能也使得原先接種點(diǎn)變動(dòng)頻繁的兒童納入了信息系統(tǒng)管理。

從重復(fù)建檔情況看，點(diǎn)內(nèi)重復(fù)建檔仍占21．6％，說明部分接種單位未定期清理系統(tǒng)內(nèi)重卡，點(diǎn)外重卡多數(shù)為平臺(tái)建設(shè)前已錄入的兒童個(gè)案，需上級(jí)疾控部門對(duì)點(diǎn)外重卡及時(shí)合并。全市所有接種點(diǎn)均已啟用異地下載功能，有1／3的流動(dòng)兒童為異地遷入兒童，說明異地下載功能可正常有效地使用。免疫規(guī)劃信息管理網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)短信功能的開通，實(shí)現(xiàn)了接種預(yù)約、漏種兒童催種，在查漏補(bǔ)種活動(dòng)中也發(fā)揮重要作用，為全市免疫規(guī)劃的實(shí)施帶來便利。

第2篇

1材料與方法

1.1藥物及試劑舒關(guān)溫經(jīng)沖劑(SGWJCJ)由制川烏、川斷、威靈仙、土鱉蟲等藥組成。舒關(guān)清絡(luò)沖劑(SGQLCJ)由生地、功勞葉、雪花、鬼箭羽等藥組成，県痹沖劑(WBCJ)為大連長(zhǎng)白山制藥有限公司出品?？勾笫驣gG免疫血清，由鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重150～200g雄性大白鼠(SD)，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3方法大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，參照Freund''''s完全佐劑性關(guān)節(jié)炎法［2］，將大鼠隨機(jī)分為6組，每日分別灌服不同的藥物，連續(xù)21d。另組灌生理鹽水作正常對(duì)照。28d后大鼠眼眶取血進(jìn)行免疫指標(biāo)測(cè)定。

2結(jié)果

2.1IgG含量和循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)測(cè)定采用單向免疫擴(kuò)散法測(cè)IgG，DEG6000沉淀法/比濁法測(cè)CIC，結(jié)果IgG(Dimm)正常組11.300±1.930，模型組14.100±0.487，比正常組顯著增加，P＜0.01，舒關(guān)溫經(jīng)沖劑和舒關(guān)清絡(luò)沖劑小劑量組為11.388±2.205和11.838±1.604，均顯著低于模型組，P＜0.01，而兩沖劑的大劑量組降低不明顯，CIC各組數(shù)值變化不顯著。

2.2紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定［3］結(jié)果見表1。

表1舒關(guān)沖劑對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎紅細(xì)胞免疫功能的影響(±s，%)

Tab.1EffectsofSGCJonRBC-C3b-R&RBC-IC-Rofratswithadjuvantarthritis(±s，%)

Dose(g/kg)nRBC-C3b-RRBC-IC-R

Normal—815.667±4.6676.500±2.811

Model—810.875±2.6961)10.625±2.5602)

SGWJCJlargedosage4.8914.888±2.9773)10.286±2.430

SGWJCJlittledosage1.6712.857±2.9113)9.182±2.603

SGQLCJlargedosage4.8816.375±2.6154)9.625±2.825

SGQLCJlittledosage1.6814.625±5.3443)8.125±1.8853)

WBCJ6.01115.730±4.6903)9.444±2.639

Note:1)P＜0.05，2)P＜0.01，vsnormal；3)P＜0.05，4)P＜0.01，vsmodel

3討論

目前普遍認(rèn)為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程是免疫調(diào)節(jié)功能失調(diào)和紅細(xì)胞免疫功能異常兩者共同作用的結(jié)果［4］。

利用Freund''''s完全佐劑刺激SD大白鼠形成免疫反應(yīng)，造成免疫功能失調(diào)。本次實(shí)驗(yàn)中模型組與正常對(duì)照組比較：RBC-C3b受體花環(huán)率下降(P＜0.05)，RBC-IC花環(huán)率上升(P＜0.01)，IgG上升(P＜0.01)，CIC也有所提高(P＜0.05)，這與以往的一些報(bào)道相符［1，4］。紅細(xì)胞免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，而紅細(xì)胞主要通過膜上C3b受體粘附免疫復(fù)合物，攜至肝、脾，由吞噬細(xì)胞吞噬［5］。因此紅細(xì)胞C3b受體活性的強(qiáng)弱直接影響機(jī)體中免疫復(fù)合物的被清除的程度，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者是由于抗原進(jìn)入機(jī)體被巨噬細(xì)胞吞噬并與其膜上的HLA-DR分子結(jié)合成復(fù)合物引起免疫反應(yīng)，激活B淋巴細(xì)胞，分泌大量免疫球蛋白，又與自身IgG結(jié)合形成CIC沉積在關(guān)節(jié)膜，激發(fā)膠原酶和破骨細(xì)胞致使關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞而發(fā)病。我們這次試驗(yàn)說明舒關(guān)溫經(jīng)沖劑、舒關(guān)清絡(luò)沖劑能有效地恢復(fù)紅細(xì)胞的抗原提呈功能，從而調(diào)節(jié)免疫紊亂，以恢復(fù)機(jī)體的正常免疫功能，這對(duì)機(jī)體祛除病邪及疾病的恢復(fù)有著積極的作用。

許化溪鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，鎮(zhèn)江212001

作者簡(jiǎn)介：陸躍鳴，女，39歲，實(shí)驗(yàn)師；

周學(xué)萍，女，39歲，中醫(yī)內(nèi)科博士，副研究員

作者單位：(南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京210029)

4參考文獻(xiàn)

1何紹奇主編.現(xiàn)代中醫(yī)內(nèi)科學(xué).北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1991：506-508

2徐叔方.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1985：534-536

3郭峰.紅細(xì)胞免疫功能的初步觀察.中華醫(yī)學(xué)雜志，1982；61(12)：715

第3篇

關(guān)鍵詞肺心病紅細(xì)胞免疫功能脂質(zhì)過氧化

Relationshipbetweenperoxidationinerythrocytemembraneandandredcellimmunefunctionincorpulmonalesubjects

JIANGYong-Tang,CHENXue-Kui,ANJi-Hongetal.

DepartmentofRespiratorySystem，The2ndClinicColleage-NornamBethuneUniversityofMecicalSciences,Changchun130041

AbstractObjective：Toevaluatetherelationshipbetweenperoxidationinerythrocytemembraneandredcellimmunefunctionincorpulaonale.Methods：Theredcellimmunefunctionandthelevelsofmalonyldialdehyde(MDA)inplasmanderythrocytemembraneweretestedbyredcellyeastmixtureroseandthiobarbituricacid(TBA)methods.Results：ThelevelsoferythrocyteC3breceptorwassignificantlydecreasedinacutestagecorpulmonale(P<0.01).ThelevelsofplasmaanderythrocytemembraneMDAincorpulmonalewerehigherthanthoseinhealthy(P<0.01).Conclusion：Theresultsindicatedthatlipidperoxidation,particularlyinerythrocytemembrane,mightcontributetothedecreaseoferythrocyteofreceptor.

KeywordsCorpulmonaleRedcellimmunefunctionLipidperoxidation

丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)中重要的中間產(chǎn)物，MDA可嚴(yán)重?fù)p壞細(xì)胞膜組分、結(jié)構(gòu)和功能〔見：JainSK.Theaccumulationofmalonyldialdebyde,anendofproductoffattyacidperoxidation,candisturbaminophospholipidorganizationinthemembranebilayerofhumanerythrocyte.JBiolChem,1984;259:339〕。紅細(xì)胞膜上存在具有免疫粘附活性的C3b受體，由于紅細(xì)胞免疫粘附(Redcellimmuneadherence,RCIA)作用，紅細(xì)胞得以發(fā)揮攜帶和清除循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)，促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬，調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫等多種功能〔見：郭峰.紅細(xì)胞免疫研究概況.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，1995；15(3)：18〕。為探討肺心病患者紅細(xì)胞膜MDA對(duì)紅細(xì)胞C3b受體的影響，我們自1995年9月～1996年4月選擇住院肺心病患者進(jìn)行觀察，報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1病例選擇正常對(duì)照組：體檢健康者24例，肺心病組：60例。全部病例分兩組：急性期32例，恢復(fù)期28例。

1.2方法

1.2.1紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率(RBC-C3bRR)和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率(RBC-ICR)試驗(yàn)采用郭氏方法。

1.2.2紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化水平測(cè)定血漿及紅細(xì)胞膜MDA測(cè)定用內(nèi)藤氏法。膜蛋白定量采用Lowry法。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩組間比較用t或t′檢驗(yàn)，用直線相關(guān)分析和多元逐步回歸分析判定各指標(biāo)間的關(guān)系。

2結(jié)果

2.1紅細(xì)胞免疫功能肺心病RBC-C3bRR明顯降低，RBC-ICR和正常無顯著差異。血漿MDA和紅細(xì)胞膜MDA水平明顯升高。急性期肺心病患者RBC-C3bRR和RBC-ICR顯著低于恢復(fù)期患者，后者RBC-C3bRR降低和血漿MDA升高仍和正常組有顯著差異。RBC-ICR升高和紅細(xì)胞膜MDA升高與正常組無明顯差異。

2.2紅細(xì)胞C3b受體活性和脂質(zhì)過氧化損壞關(guān)系肺心病患者血漿MDA和紅細(xì)胞膜MDA水平呈正相關(guān)，血漿和紅細(xì)胞膜MDA水平升高和RBC-C3bRR降低呈負(fù)相關(guān)，多元逐步回歸分析血漿及紅細(xì)胞膜MDA與紅細(xì)胞C3b受體的偏回歸系數(shù)分別為-0.1160，-0.1613，復(fù)相關(guān)系數(shù)R=0.7601。提示紅細(xì)胞膜MDA和紅細(xì)胞C3b受體關(guān)系更密切，見表1，表2。

表1肺心病患者血漿MDA和紅細(xì)胞膜MDA與紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率相關(guān)分析(n=60)

Tab.1RelativeanalysisbetweenRBC-C3bRRandMDAinplasmaanderythrocytemembraneincorpulmonal(n=60)

Dependent

variableIndependentrP

RBC-MDAP-MDA0.9209<0.01

RBC-C3bRRRBC-MDA

P-MDA-0.8718

-0.7339<0.01

<0.01

表2紅細(xì)胞免疫功能、血漿和紅細(xì)胞膜MDA水平測(cè)定結(jié)果

Tab.2Resultofredcellimmunefunction,MDAinplasmaanderythrocytemembrane

nRBC-C3bRRRBC-C3bRRP-MDARBC

(±s，%)(±s，%)(nmol/ml)(μmol/ml)

Normalcontrol2419.50±4.308.25±6.154.67±0.100.452±0.026

CorPulmonale6010.87±4.851)7.94±5.774.62±0.241)0.569±0.0081)

Remissionstage2815.55±2.731)9.30±6.175.12±0.141)0.469±0.046

Acutestage326.78±1.032)6.74±4.932)7.55±0.212)0.641±0.0572)

Note:vsnormalcontrol,1)P<0.01;2)vsremissionstage,P<0.01

3討論

本組資料顯示：肺心病患者紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率明顯降低，紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率無明顯改變。提示紅細(xì)胞C3b受體降低，紅細(xì)胞免疫粘附功能降低，為原發(fā)免疫功能低下，即紅細(xì)胞膜上C3b受體受到破壞和影響所致。我實(shí)驗(yàn)室曾報(bào)道肺心病患者血漿MDA水平升高。本研究進(jìn)一步證明其紅細(xì)胞膜MDA亦增高，兩者呈正相關(guān)。MDA是脂質(zhì)過氧化降解的中間產(chǎn)物，脂質(zhì)過氧化作用可嚴(yán)重破壞細(xì)胞膜成分、結(jié)構(gòu)和功能。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)肺心病患者M(jìn)DA升高和紅細(xì)胞C3b受體活性呈明顯負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步多元逐步回歸顯示兩者關(guān)系更為密切。提示血漿MDA升高，尤其是紅細(xì)胞膜MDA升高可以嚴(yán)重影響C3b受體活性。

第4篇

幽門螺桿菌（Hp）作為慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤發(fā)生發(fā)展中的重要致病因素已為大量研究證實(shí)，其致病機(jī)理包括Hp的尿素酶、蛋白酶、脂酶、磷脂酶A、趨化因子及細(xì)胞空泡毒素（VacA）等直接致病，也包括Hp引起宿主的炎癥及免疫應(yīng)答致病[1]。本文主要就Hp菌苗與宿主的免疫應(yīng)答及相關(guān)問題的研究進(jìn)展作一簡(jiǎn)要綜述。

hp與菌苗研究

Hp感染是世界范圍的，而且是終身感染。新近研究顯示，口服菌苗可誘導(dǎo)針對(duì)Hp感染的保護(hù)性免疫，并且菌苗可治愈已存在的HP感染性病變，從而表明用菌苗治療Hp感染是可行的[2]。用霍亂毒素（CT）B亞單位或大腸桿菌不耐熱毒素（LT）作粘膜佐劑的Hp抗原誘導(dǎo)免疫已獲成功，即Hp對(duì)宿主自然免疫應(yīng)答的抵抗能被瓦解。成功用作Hp菌苗的抗原有Hp細(xì)胞裂解產(chǎn)物、尿素酶、VacA、熱休克蛋白和過氧化物酶等。免疫學(xué)研究及動(dòng)物模型也證實(shí)口服免疫不僅可以預(yù)防而且能治愈Hp感染，并且鼻內(nèi)及結(jié)腸免疫均可引起胃粘膜的免疫保護(hù)[3]。新近Ghiara等用重組VacA或細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA）作抗原，減毒的大腸桿菌LT突變體作為佐劑，成功地根除了小鼠模型中的慢性Hp感染，并證明該治療性菌苗對(duì)Hp再感染有同樣有效的免疫防御作用[4]?？傊瓾p作為非侵入性細(xì)菌，定居于胃粘膜表面，可引起機(jī)體的免疫及炎癥反應(yīng)。面對(duì)機(jī)體強(qiáng)大的免疫應(yīng)答，Hp仍能繼續(xù)生存并致病，其機(jī)理尚不清楚。免疫效應(yīng)分子必須進(jìn)入胃粘膜表面，才能中和和殺傷Hp。目前認(rèn)為該作用與胃分泌液中出現(xiàn)抗Hp特異性分泌型IgA抗體相關(guān)。這種抗體也在感染的動(dòng)物及人體中出現(xiàn)，所以細(xì)胞免疫效應(yīng)在防御或治療Hp感染中的作用仍需進(jìn)一步研究。另外，了解Hp逃逸免疫效應(yīng)分子的機(jī)理以及Hp菌苗誘導(dǎo)宿主的免疫保護(hù)及免疫損傷的機(jī)理，將為更有效的菌苗篩選提供可能。最近報(bào)道對(duì)Hp感染的易感性與小鼠中主要組織相容性復(fù)合體（MHC）位點(diǎn)直接相關(guān)，這是否適用于菌苗設(shè)計(jì)也需進(jìn)一步研究證實(shí)[5]。

hp與宿主免疫

Hp誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答的途徑，目前認(rèn)為包括Hp可溶性產(chǎn)物的被動(dòng)吸收，上皮細(xì)胞直接內(nèi)吞細(xì)菌抗原，抗原通過被破壞的胃上皮進(jìn)入組織激發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答[6]。粘膜對(duì)不同Hp免疫應(yīng)答的差異是決定病變后果的重要因素。其中包括B細(xì)胞及相應(yīng)的IgG、IgM的體液免疫應(yīng)答，以及在Hp感染相關(guān)慢性活動(dòng)性胃炎病變局部出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的細(xì)胞免疫應(yīng)答[1]。

Hp與體液免疫

實(shí)際上所有Hp感染慢性胃炎病人胃粘膜中均有針對(duì)Hp的特異性IgA出現(xiàn)，而IgM應(yīng)答一般只發(fā)現(xiàn)于Hp感染急性期的胃粘膜局部。產(chǎn)生IgG（特別是IgG1）的漿細(xì)胞，在慢性胃炎中明顯增加。在胃十二指腸粘膜局部證明有針對(duì)Hp感染的特異性IgG應(yīng)答。粘膜表面分泌型IgA的出現(xiàn)對(duì)于抑制細(xì)菌抗原的攝取、阻止Hp的粘附和移動(dòng)以及中和毒素都非常重要，即IgA在Hp感染中起保護(hù)性免疫作用。另外，由于IgA不能有效地激活補(bǔ)體，從而在阻滯Hp特異性IgG介導(dǎo)的補(bǔ)體活化及相關(guān)的中性粒細(xì)胞活化炎癥及介質(zhì)釋放中起重要作用。Hp特異性IgE抗體在感染病人的血清中同樣存在，但依賴Hp特異性IgE的肥大細(xì)胞釋放組胺是否在胃粘膜病變中起作用尚不清楚[6]。

Hp與細(xì)胞免疫

針對(duì)Hp特異性T細(xì)胞也出現(xiàn)于Hp感染病人的胃粘膜中，其中CD45RO+T細(xì)胞在Hp感染相關(guān)的慢性胃炎病人的胃粘膜中明顯增加。分泌γ干擾素而不是白細(xì)胞介素4（IL-4）的T細(xì)胞在病變局部的浸潤(rùn)也證實(shí)Hp誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答以Th1型應(yīng)答為主。Hp抗原特異性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，不僅參與調(diào)節(jié)針對(duì)Hp的體液免疫應(yīng)答，而且參與調(diào)節(jié)胃粘膜上皮中與粘膜防御及抗原呈相關(guān)的關(guān)鍵分子的表達(dá)[6]。新近研究發(fā)現(xiàn)，Hp誘導(dǎo)的抗原特異性T淋巴細(xì)胞以輔T淋巴細(xì)胞為主，包括Th1及Th2細(xì)胞。其作用包括兩個(gè)方面：增強(qiáng)炎癥反應(yīng)及減少Hp在胃粘膜表面生存。未免疫小鼠感染Hp主要誘發(fā)Th1型應(yīng)答，通過增加γ干擾素分泌而增強(qiáng)胃粘膜損傷性的炎癥反應(yīng)。相反，Hp菌苗抗原免疫后的小鼠感染Hp既誘發(fā)Th1型應(yīng)答，又誘發(fā)Th2型應(yīng)答。Th2型應(yīng)答通過增加IgG1抗體、IL-4和IL-5的產(chǎn)生而減少Hp在胃粘膜表面的生存，起免疫保護(hù)作用。Hp及其菌苗誘導(dǎo)Th1和Th2細(xì)胞的作用共存，即增強(qiáng)炎癥反應(yīng)的損傷性作用及減少Hp在胃粘膜表面生存的免疫保護(hù)作用同時(shí)存在。Hp感染誘導(dǎo)的應(yīng)答以Th1型為主，即以炎癥性損傷為主；而疫苗誘導(dǎo)的應(yīng)答以Th2型為主，即以免疫保護(hù)為主。中和γ干擾素可阻斷Th1型免疫應(yīng)答，減輕Hp的致病作用，及增強(qiáng)Th2細(xì)胞在疫苗免疫保護(hù)中的作用，從而達(dá)到治療目的[7]。

hp誘導(dǎo)的自然殺傷（NK）細(xì)胞在宿主的防御及炎癥反應(yīng)中起重要作用。外周血淋巴細(xì)胞與Hp的相互作用誘導(dǎo)非MHC限制的NK細(xì)胞活化并分泌γ干擾素，NK細(xì)胞的活化及γ干擾素的分泌對(duì)于激活巨噬細(xì)胞及促進(jìn)Th1型抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答均非常重要。另外，作為NK細(xì)胞的活化因子，IL-12可由Hp刺激的中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞產(chǎn)生[6]。

Hp與自制免疫

一些Hp中脂多糖（LPS）的O-特異性多糖鏈抗原區(qū)結(jié)構(gòu)與巖藻糖化的Lewisy血型抗原類似，而另一些菌株與LewisY血型抗原類似[8]。一些抗Hp的單克隆抗體與人和鼠的胃上皮細(xì)胞存在交叉反應(yīng)。這種交叉反應(yīng)與LPS模擬或Hp58kDa蛋白相關(guān)。該58kDa蛋白屬于熱休克蛋白（hsp60）家族成員，與人hsp60有高度同源性。而在T細(xì)胞水平上不存在宿主與細(xì)菌hsp60的交叉反應(yīng)。根除Hp感染的結(jié)果表明無論是抗LPS決定簇還是hsp60的自身免疫應(yīng)答，對(duì)胃粘膜的完整性沒有長(zhǎng)期的破壞作用[6]。Ko等用214種抗Hp的單克隆抗體檢測(cè)其與人組織交叉反應(yīng)能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)71種抗體與胃粘膜中Hp起反應(yīng)，25種抗體與胃上皮細(xì)胞反應(yīng)，8種抗體與十二指腸上皮細(xì)胞反應(yīng)。與胃上皮細(xì)胞起交叉反應(yīng)的抗體包括抗Hp尿素酶抗體、抗鞭毛抗體、抗LPS抗體及抗熱休克蛋白抗體。提示Hp引起的宿主自身免疫應(yīng)答涉及多種Hp成分[9]。Faller等發(fā)現(xiàn)Hp感染與抗胃小凹上皮細(xì)胞膜及壁細(xì)胞中小管結(jié)構(gòu)的自身抗體明顯相關(guān)[10]。另外新近研究發(fā)現(xiàn)，HpLPS表達(dá)人血型抗原并非固定不變，而是呈現(xiàn)期相性改變，包括三種類型變異體：第一種是表達(dá)Lewisx型抗原的LPS失去α1，3-巖藻糖，變?yōu)镮抗原，這種改變是可兼管的；第二種是LPS的Lewisx抗原失去聚合主鏈成為表達(dá)單體的LewisY抗原；第三種是LPSlewisY抗原獲得α1，2-巖糖，使LewisX和LewisY抗原的表達(dá)均被增強(qiáng)。表明同一Hp菌珠存在不同的Lewis血型抗原[11]。HPLPS的O-多糖抗原與Lewis血型抗原這種類似結(jié)構(gòu)是否有種于Hp生存、引起宿主的自身免疫應(yīng)答、促進(jìn)Hp粘附及增強(qiáng)炎癥反應(yīng)尚需進(jìn)一步研究證實(shí)[8]。

Hp與免疫抑制

有研究提出Hp直接誘導(dǎo)宿主的免疫調(diào)節(jié)，使針對(duì)Hp的有效免疫不能發(fā)生。Hp胞漿中一種非細(xì)胞毒素蛋白可以抑制外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖，該蛋白分別抑制單核細(xì)胞表面CD14及T細(xì)胞表面CD25分子的表達(dá)[12]。Hp誘導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)對(duì)免疫介導(dǎo)的粘膜損傷有一定的保護(hù)作用，但同時(shí)也導(dǎo)致Hp感染的長(zhǎng)期持續(xù)存在。盡管Hp能刺激宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體及細(xì)胞因子，但是Hp亦產(chǎn)生一種介導(dǎo)抑制人細(xì)胞免疫的蛋白質(zhì)，并且Hp編碼的超氧化物歧化酶（SOD）基因與侵襲性細(xì)胞內(nèi)致病菌的SOD基因存在同源性，提示SOD涉及輔助Hp抵抗吞噬細(xì)胞的殺傷作用[8]。另外也有研究發(fā)現(xiàn)活Hp可下調(diào)病毒特異性CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答及Th1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的反應(yīng)，從而降低宿主的細(xì)胞免疫應(yīng)答[13]。

hp與MHC

hp誘導(dǎo)的NK細(xì)胞分泌的γ干擾素使胃上皮細(xì)胞MHCⅡ類抗原表達(dá)增高，即增加對(duì)胃上皮細(xì)胞的細(xì)胞毒損傷作用[6]。Maekawa等發(fā)現(xiàn)Hp誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞MHCⅡ類抗原分子的表達(dá)比γ干擾素的作用強(qiáng)，并且胃上皮細(xì)胞可以起抗原提呈細(xì)胞的作用而參與對(duì)Hp的免疫應(yīng)答[14]。

結(jié)語(yǔ)

Hp對(duì)宿主的影響及宿主對(duì)Hp菌苗的應(yīng)答既包括炎癥反應(yīng)，也包括免疫應(yīng)答；既涉及體液免疫應(yīng)答，也涉及細(xì)胞免疫應(yīng)答；既存在免疫保護(hù)作用，也存在免疫損傷作用。因此，深入研究并闡明Hp及其菌苗誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答的機(jī)理，將為有效的Hp菌苗的研制提供正確的理論指導(dǎo)及新的研究思路。

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第5篇

［關(guān)鍵詞］妊娠相關(guān)血漿蛋白A；固相時(shí)間分辨熒光免疫；親和素—生物素—聚乙烯胺—4,7二氯磺苯基1，10啡羅啉2，9二羧酸—銪復(fù)合物；唐氏綜合征

DevelopADirectSolidPhaseLanthaneTimeresolvedFluoroimmunoassayReagentofPAPPAutilizingPVA

Abstract:ObjectiveTodevelopadirectsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassayreagentofPAPPAbysynthesizingacomplexof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.MethodsPolyvinylamine(PVA)waslabeledwithbiotinstreptavidinandeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid(BCPDA).UsinglabeledPVAcomplex,WedesignedtwositesandwichtimeresolvedfluoroimmunoassayofPAPPAandevaluatedassaycharacteristicsofPAPPAkit.ResultsWesuccessedsynthesizingaconjuageteof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+andareagentofPAPPA.Detectionlimitsachievedwere0.7mIU/L.Thecalibrationcurvewaslinear010000mIU/L.Intraandinterassayimprecision(CV)was3.89%4.96%and7.35%9.27%.Recoverywas95.8%104.2%.ConclusionsTheconjugateof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+synthesiziedwasreactive,highlyfouorescent.Asortsofkitcouldbesynthesized,takingadvantageofit.ThereagentofPAPPAwaspotentiallysuitedforuseinclinicalwithhighlyanalyticalsensitivity.

Keywords:PregnancyassociatedplasmaproteinA;Directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay;StreptavidinbiotinPolyvinylamineeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid;Down''''sSyndrome

妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PregnancyassociatedplasmaproteinA，PAPPA)是一種高分子α2糖蛋白，20世紀(jì)70年代在孕婦血清中被發(fā)現(xiàn)［1］。在孕婦血中主要PAPPA是胎盤滋養(yǎng)層組織分泌，它是一種異源四聚體，由兩個(gè)分子量為200000~250000亞基構(gòu)成。PAPPA亞基和兩個(gè)嗜紅細(xì)胞主要基礎(chǔ)蛋白(Proformofeosinophilmajorbasicprotein)以二硫鍵結(jié)合而成［2］，在孕婦血中只存在微量游離單體PAPPA。PAPPA亞基由1547個(gè)多聚核苷酸構(gòu)成，包括1個(gè)拉長(zhǎng)的鋅指結(jié)構(gòu)，3個(gè)Lin—notch重復(fù)序列，以及5個(gè)短一致重復(fù)序列［3］。在體內(nèi)PAPPA是一種蛋白酶，主要針對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)和胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5(IGFBP5)起作用。胰島素樣生長(zhǎng)因子I(IGFI)在促進(jìn)細(xì)胞分裂和增殖起重要作用，它主要通過IGF1受體起作用，IGFI、II的生物活性受6個(gè)高親和性IDFBP調(diào)節(jié)［4，5］。PAPPA主要用于產(chǎn)前篩查唐氏綜合征(Down''''sSyndrome，DS)，迄今醫(yī)學(xué)上對(duì)此病尚無有效的治療和預(yù)防措施，只能通過產(chǎn)前篩查防止DS兒的出生，但目前開展的絨毛活檢,羊水穿刺及臍帶血穿刺均為侵入性檢查,有1%～3%的流產(chǎn)率,且方法繁瑣,出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng),不適宜大范圍孕婦的普查,僅限于高危人群的診斷。大量報(bào)道認(rèn)為PAPPA可作為DS胎兒產(chǎn)前篩查的的標(biāo)志物。在15周～20周通過結(jié)合孕婦孕周、超聲診斷和FreeβHCG可以鑒別65%～75%，但要在3個(gè)月～6個(gè)月結(jié)合AFP、游離E3以及抑制素上述成分可鑒別85%～90%［6］。有文獻(xiàn)［7］報(bào)道PAPPA在急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)的早期診斷有一定的意義，PAPPA在ACS患者血清含量＜30mIU/L，同時(shí)結(jié)構(gòu)不同于孕婦體內(nèi)的PAPPA且存在動(dòng)態(tài)變化，必須利用超靈敏的方法進(jìn)行檢測(cè)。國(guó)內(nèi)PAPPA的診斷試劑大多為ELISA和PerkinElmer公司生產(chǎn)的解離增強(qiáng)時(shí)間分辨熒光免疫分析(dissociatedenhancelanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DELFIA)試劑，無國(guó)產(chǎn)PAPPA時(shí)間分辨熒光試劑。我們利用PVA(聚乙烯胺)作為載體結(jié)合BCPDA鑭系螯合物合成一種高靈敏的固相時(shí)間分辨熒光免疫分析(directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DSLFIA)試劑。為提高檢測(cè)靈敏度和克服BCPDA標(biāo)記抗體使抗體失活的問題，我們引入了生物素親和素(biotinstreptavidinsystem)系統(tǒng)。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1試劑4,7二氯磺苯基1，10啡羅啉2，9二羧酸［4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid,BCPDA自制］；純化親和素(Streptavidin，SA，Sigma公司)；硫代琥珀酰亞氨6生物素氨基己酯類［Sulfosuccinimidyl6''''(biotinamido)6hexanamidohexanoate，SulfoNHSLCLCBiotin，pierceChemicalCompany］；聚乙烯胺氫氯化物(Polyvinylaminehydrochloride，PVA,ChemicalDynamicsCorp)；硼酸鈉、二甲亞砜(天津化學(xué)試劑有限公司)；單克隆抗體根據(jù)文獻(xiàn)［5］選擇Hyb234—5(StatensserumInstitut)作為檢測(cè)抗體，mAb10E1(HyTestOy，F(xiàn)inland)作為捕獲抗體；PAPPA標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品購(gòu)于PE公司(質(zhì)控血清：Control1508mIU/L，Control22325mIU/L，Control3為4952mIU/L)；鼠IgG(晶美公司)。

1.1.2儀器Wallac1420多標(biāo)記計(jì)數(shù)儀(WallacOY，F(xiàn)inland)；HPLC硅柱TSK250尺寸排阻柱(BIORAD公司)；96白色微孔板(NUNC公司)、親和素包被板(InnotracDiagnosticsOy公司)；Amicon可濃縮離心管(Amiconmicroconcentrationunits，MW30000Cutoff)

1.2方法

1.2.1BCPDA的制備參見文獻(xiàn)詳細(xì)步驟［8～10］。

1.2.2生物素聚乙烯胺BCPDA［(Bio)xPVA(BCPDA)y］復(fù)合物的構(gòu)建［11］用0.5M的碳酸鹽(pH9.1)緩沖液配制濃度為10mg/ml聚乙烯胺(PVA)溶液，將200μgNHSLCLCBiotin溶于20μl碳酸鹽緩沖液中，取200μl上述PVA溶液加入20μl上述NHSLC—LCBiotin溶液中，振蕩混勻，室溫反應(yīng)1.5h(PVA∶Bio=1∶15)，用0.5M碳酸鹽緩沖液將混合液稀釋到1ml，將固體BCPDA研磨成粉末狀，先在上述1ml混合液中加入5mgBCPDA，用力攪拌，直到溶解，重復(fù)加3次BCPDA，5mg/次，共計(jì)20mgBCPDA，在室溫放置5h～6h，直到溶液澄清，轉(zhuǎn)移到透析袋中，用0.1MNaHCO35L透析、過夜、重復(fù)透析2次，盡可能除去沒反應(yīng)的BCPDA和生物素。

1.2.3HPLC純化(Bio)xPVA(BCPDA)y復(fù)合物離心濃縮上述(Bio)xPVA(BCPDA)y復(fù)合物到0.3ml～0.5ml(用Amiconmicroconcentrationunits，MW30000Cutoff)。流動(dòng)相0.05MTris緩沖液(pH7.70)，控制HPLC流速0.8ml/min，在325nm處監(jiān)測(cè)層析液(325nm為BCPDA最大吸收峰)，上樣后，馬上收集，(Bio)xPVA(BCPDA)y在10管～16管約5ml左右，取10μl(Bio)xPVA(BCPDA)y層析液加入90μl水滴入親和素包被板微孔中，溫育30min，洗板，加入用Tris緩沖液配制的10M～5MEuCl3100μl，反應(yīng)10min，洗板、干燥，用Wallac1420檢測(cè)Eu3+的熒光強(qiáng)度，沒結(jié)合復(fù)合物的被洗去了，沒結(jié)合BCPDA的復(fù)合物因無法結(jié)合Eu3+而沒有熒光，計(jì)算標(biāo)記的PVA，大約每分子結(jié)合50個(gè)～100個(gè)BCPDA分子。

1.2.4構(gòu)建親和素生物素PVABCPDA［(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+］復(fù)合物［11］用0.1MTris緩沖液(pH7.8)配制小牛血清白蛋白(BSA溶液)60g/L，同時(shí)加入EuCl3，使Eu3+濃度為10-6mol/ml，用雙蒸水配制親和素溶液濃度為1mg/ml，取上述BSA溶液1ml，加入10μl親和素溶液，再加入50μl的(Bio)xPVA(BCPDA)y復(fù)合物(通過固相免疫分析，棋盤滴定法確定最佳用量比，步驟略，結(jié)果見后)，混勻，55℃溫育1.5h，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物反應(yīng)活性用生物素化的各種濃度(0ng/50μl，0.5ng/50μl，5ng/50μl，50ng/50μl，100ng/50μl)鼠IgG包被96孔微板(同第7步)，用60g/LBSA和0.1mol/LTris緩沖液(pH7.8)10倍稀釋(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，在板的微孔中加入100μl稀釋后的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，室溫反應(yīng)30min，洗板、干燥，測(cè)量熒光強(qiáng)度(cpm)。本實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證復(fù)合物的反應(yīng)活性。

1.2.6生物素標(biāo)記10E1抗體［12］用二甲亞砜制備硫代琥珀酰亞氨6生物素氨基乙酯溶液(10mg/ml)，將抗體10E1溶于0.1mol/L硼酸鈉溶液(pH8.8)，每1mg抗體中加硫代琥珀酰亞氨6生物素氨基己酯類溶液210μg混合，室溫放置4h，在上述溶液中加入20ml1mol/LNH4Cl，室溫反應(yīng)10min，將反應(yīng)液進(jìn)行透析，除去未結(jié)合的生物素，將抗體濃度用分析緩沖液配置成8ng/μl，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.7單克隆Hyb234—5抗體包被96孔微滴定板將抗體溶于0.1M磷酸鹽緩沖液(pH4.9)，配置成5μg/ml抗體溶液，在每一孔中加入80μl抗體溶液，室溫反應(yīng)20h，然后用生理鹽水洗3次，然后每孔加120μl0.05MTrisHcl緩沖液(pH7.4含0.9%生理鹽水、0.05%NaN3、0.5%小牛血清白蛋白BSA)浸泡2h。吸干緩沖液，干燥，密封4℃保存。

1.2.8樣本收集、定標(biāo)、靈敏度、精密度和回收實(shí)驗(yàn)分析過程選取懷孕8周、9周、11周婦女血清各一份，經(jīng)PE公司的DELFIA試劑和D&G公司的ELISA試劑多次精確測(cè)定，值分別為：P1863.27mIU/L；P21273.63mIU/L；P32727.23mIU/L。用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(6%BSATSA緩沖液：150mmol/LNaCl、60g/LBSA、50mmol/LTrisHCl，pH7.8)將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋濃度為：S00mIU/L(稀釋液)、S120mIU/L、S2200mIU/L、S31000mIU/L、S45000mIU/L、S510000mIU/L。標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)根據(jù)WHOIRP78/610(WHOInternationalLaboratoryforBiologicalstandards，StatensSeruminstitut，Denmark)，單位換算：1000mIU/L=4.5μg/ml。在單克隆Hyb234—5抗體包被96孔微滴定板，每孔加入定標(biāo)液10μl，作8次平行測(cè)量，加入50μl生物素標(biāo)記10E1抗體50μl，混勻，36℃，室溫反應(yīng)20min，洗板6次，加入100μl10倍稀釋的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，室溫反應(yīng)25min，洗板6次，吹干，Wallac1420測(cè)量熒光強(qiáng)度(cpm)，取均值，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將S00mIU/L做20次重復(fù)測(cè)試，計(jì)算均值(X)和標(biāo)準(zhǔn)差(s)，以X+2s為試劑的最小檢測(cè)限。將Control1，Control2，Control3依據(jù)定標(biāo)分析過程，同批測(cè)量20次，批間測(cè)量12次，用于評(píng)價(jià)精密度。對(duì)收集樣本(P1、P2、P3)依據(jù)定標(biāo)分析過程進(jìn)行測(cè)量，然后將Control1、Control2、Control3分別等體積加入P1、P2、P3中進(jìn)行測(cè)量，用于評(píng)價(jià)回收實(shí)驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1用HPLC純化(Bio)xPVA(BCPDA)y復(fù)合物在10min～16min出現(xiàn)(Bio)xPVA(BCPDA)y的吸收峰，沒有結(jié)合BCPDA的吸收峰在17min～24min出現(xiàn),見圖1。

圖1凈化（Bio）x－聚乙烯醇（BCPDA）y在高性能液化色譜（TSK－250過濾柱）上的變化圖。（略）

流速控制在0.8ml/min，吸光率325nm

2.2用滴定法確定親和素和(Bio)xPVA(BCPDA)y最佳配比SA量恒定0.01mg/ml，生物素標(biāo)記的抗體包被分別濃度為0ng/孔、0.5ng/孔、5ng/孔、50ng/孔，緩沖液為pH7.8TrisHcl0.1M，Eu3+10-5M，(Bio)xPVA(BCPDA)y用量從40μl～55μl選擇最佳值，50μl復(fù)合物熒光強(qiáng)度值(cpm)最佳，如圖2。

圖2滴定鏈球菌，（Bio)x－聚乙烯醇（BCPDA）y在10-3MEu3+,0.1MTris-Hclbuffer(pH7.8)緩沖液中的變化，0.01mg/ml鏈球菌，容積變動(dòng)范圍40μl~55μl，觀察到最佳容積為50μl（略）

2.3驗(yàn)證活性用生物素化的各種濃度(0ng/50μl，0.5ng/50μl，5ng/50μl，50ng/50μl，100ng/50μl)鼠IgG包被96孔微板驗(yàn)證(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物的反應(yīng)活性，在測(cè)定范圍內(nèi)成線性分布，見圖3。

圖3IgG維生素定量法標(biāo)定曲線（略）

2.4PAPPA定標(biāo)曲線及靈敏度在0mIU/L～10000mIU/L范圍內(nèi)定標(biāo)曲線為線性分布，見圖4。S0標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)20次檢測(cè)均值加2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出檢測(cè)限為0.7mIU/L(數(shù)據(jù)沒顯示)。

圖4PAPP-A標(biāo)定曲線（略）

2.5批內(nèi)、批間精密度對(duì)質(zhì)控血清批內(nèi)進(jìn)行20次分析，批間進(jìn)行12次分析，得到批內(nèi)變異系數(shù)3.89%～4.96%,批間變異系數(shù)在7.35%～9.27%之間,見表1。

表1批內(nèi)、批間變異系數(shù)比較（略）

2.6回收實(shí)驗(yàn)對(duì)收集樣本(P1、P2、P3)依據(jù)定標(biāo)分析過程進(jìn)行測(cè)量，然后將Control1、Control2、Control3分別等體積加入P1、P2、P3中進(jìn)行多次測(cè)量，分別計(jì)算回收率95.8%～104.2%,見表2。

表2回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較（略）

3討論

臨床化學(xué)家最關(guān)心的問題是分析技術(shù)靈敏度，這也是臨床診斷試劑的核心。近來，在臨床化學(xué)檢測(cè)物質(zhì)的濃度的范圍10-3mol/L～10-16mol/L。PCR以及其他的體外擴(kuò)增技術(shù)使DNA、RNA檢測(cè)方便、高效、特異。不幸的是蛋白不能復(fù)制，最敏感的定量方法是依靠蛋白之間的特異性結(jié)合如抗原抗體反應(yīng)。一個(gè)提高蛋白檢測(cè)靈敏度的方法就是信號(hào)放大，即在蛋白上標(biāo)記可以檢測(cè)的標(biāo)記物，通過標(biāo)記物的信號(hào)放大而達(dá)到更容易檢測(cè)的目的。時(shí)間分辨免疫學(xué)技術(shù)是80年代迅速發(fā)展起來的的一種公認(rèn)的最有發(fā)展前途的非放射免疫標(biāo)記技術(shù)，其中熒光鑭系螯合物具有較大的Stokes位移(275nm)，較窄的發(fā)射光譜(10nm)，較長(zhǎng)的熒光壽命(10us～1000us)，而被廣泛構(gòu)建時(shí)間分辨熒光免疫試劑。臨床運(yùn)用最廣泛的是PE公司生產(chǎn)的解離增強(qiáng)鑭系時(shí)間分辨熒光免疫分析(dissociationenhancedlanthanidefluoroimmunoassay，DELFIA)試劑，它必須使Eu3+與螯合物分離，由于其信號(hào)較弱，必須加入增強(qiáng)液來發(fā)大信號(hào)，操作煩瑣且在加樣的過程中可能引起外源性的污染，這些弊端影響了它的應(yīng)用。在1987年，Evangelista和Diamandis合成一種新的螯合物BCPDA，開創(chuàng)了固相時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)，解決了DELFIA上述問題［8，9］，但是BCPDA的較大分子量、表面特性和直接標(biāo)記蛋白容易引起蛋白的失活對(duì)它應(yīng)用帶來一些問題，解決的辦法就是連接一個(gè)載體。我們實(shí)驗(yàn)中引入了PVA作為載體，連接BCPDA和生物素親和素。PVA直接連接蛋白技術(shù)難度較大，而生物素標(biāo)記蛋白技術(shù)比較成熟，同時(shí)親和素有4個(gè)生物素結(jié)合位點(diǎn)，可以起到信號(hào)放大作用，而提高檢測(cè)靈敏度。我們實(shí)驗(yàn)中成功的合成了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，用它去識(shí)別生物素標(biāo)記的抗體(見圖3)，結(jié)果顯示親和力非常高。實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵問題是選擇SA和(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物最佳比，我們實(shí)驗(yàn)中做了7個(gè)濃度梯度，選取結(jié)合后熒光強(qiáng)度最大的(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物濃度。利用HPLC層析純后的(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物回收率是68%。通過實(shí)驗(yàn)選擇最佳檢測(cè)抗體濃度、生物素化抗體濃度和標(biāo)本用量。Jackson［13］分析了提高靈敏度的因素即兩個(gè)關(guān)鍵的因素與最終的結(jié)合分析靈敏度相關(guān)：我們監(jiān)測(cè)標(biāo)記分子(放射性同位素、化學(xué)發(fā)光劑、熒光團(tuán))的能力；結(jié)合試劑的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)條件，在臨床化學(xué)存在一種誤導(dǎo)是特別敏感的監(jiān)測(cè)方法(化學(xué)發(fā)光、時(shí)間分辨熒光)能獲得好的結(jié)果。其實(shí)這是錯(cuò)誤的，如果實(shí)驗(yàn)試劑和條件(抗體的親和性和特異性，固相結(jié)合物的自然特性以及清洗效率)不被選擇，很難達(dá)到理想的檢測(cè)效果。為達(dá)到較高的靈敏度，需要選擇高靈敏度的標(biāo)記技術(shù)、高親和力的試劑和最好的分析條件(可將試劑的非特異性結(jié)合降到最小)。利用鑭系螯合物的時(shí)間分辨熒光免疫分析是一種高靈敏的標(biāo)記技術(shù)，關(guān)鍵是實(shí)驗(yàn)條件的選擇，我們驗(yàn)證不同孵育時(shí)間下，(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物產(chǎn)出率，以及和生物素化抗體的結(jié)合能力(數(shù)據(jù)不能顯示)。經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)選擇了Eu3+的濃度，使其能和BCPDA形成最佳比例(數(shù)據(jù)不能顯示)。反應(yīng)條件的建立中，我們篩選實(shí)驗(yàn)反應(yīng)溫度(18℃～56℃，每5℃選擇一次)和反應(yīng)時(shí)間(10min～24h)，考慮到臨床結(jié)果的報(bào)告時(shí)間，選擇了20min(數(shù)據(jù)不能顯示)。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)條件選擇，形成了PAPPA的定標(biāo)曲線，通過定標(biāo)曲線確定最低檢測(cè)限(見圖3)。我們構(gòu)建的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物可以用于多種像PAPPA這樣利用雙抗體夾心法檢測(cè)的試劑，如AFP等。我們選擇構(gòu)建PAPPA主要考慮到我國(guó)產(chǎn)前篩查項(xiàng)目的自產(chǎn)試劑較少，而且DS篩查尤為重要，由于科研經(jīng)費(fèi)的問題，沒有進(jìn)行最佳單抗配對(duì)實(shí)驗(yàn)，只是參考了國(guó)外的相關(guān)文獻(xiàn)。不過我們實(shí)驗(yàn)的核心是構(gòu)建(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，為以后構(gòu)建其他試劑做一定的前期工作。我們構(gòu)建的PAPPA試劑,回收實(shí)驗(yàn)和精密度試驗(yàn)顯示，完全滿足試劑盒要求。在今后的工作中，我們主要驗(yàn)證(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物和成品試劑盒的穩(wěn)定性，以及進(jìn)一步和PE公司的PAPPA的DELFIA試劑做大量的臨床對(duì)比實(shí)驗(yàn)?？傊?，我們成功構(gòu)建了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物和PAPPA的成品試劑，它有較高的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度，又克服了DELFIA試劑的缺點(diǎn)。

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第6篇

關(guān)鍵詞：界面符號(hào)人機(jī)工程環(huán)境

一、設(shè)計(jì)界面的涵義

界面的說法以往常見的是在人機(jī)工程學(xué)中?！叭藱C(jī)界面”是指人機(jī)間相互施加影響的區(qū)域，凡參與人機(jī)信息交流的一切領(lǐng)域都屬于人機(jī)界面。“而設(shè)計(jì)藝術(shù)是研究人一物關(guān)系的學(xué)科，對(duì)象物所代表的不是簡(jiǎn)單的機(jī)器與設(shè)備，而是有廣度與深度的物；這里的人也不是“生物人”，不能單純地以人的生理特征進(jìn)行分析?！叭说某叨?，既應(yīng)有作為自然人的尺度，還應(yīng)有作為社會(huì)人的尺度；既研究生理、心理、環(huán)境等對(duì)人的影響和效能，也研究人的文化、審美、價(jià)值觀念等方面的要求和變化”。

設(shè)計(jì)的界面存在于人一物信息交流，甚至可以說，存在人物信息交流的一切領(lǐng)域都屬于設(shè)計(jì)界面，它的內(nèi)涵要素是極為廣泛的。可將設(shè)計(jì)界面定義為設(shè)計(jì)中所面對(duì)、所分析的一切信息交互的總和，它反映著人一物之間的關(guān)系。

二、設(shè)計(jì)界面的存在

美國(guó)學(xué)者赫伯特．A．西蒙提出：設(shè)計(jì)是人工物的內(nèi)部環(huán)境(人工物自身的物質(zhì)和組織)和外部環(huán)境(人工物的工作或使用環(huán)境)的接合。所以設(shè)計(jì)是把握人工物內(nèi)部環(huán)境與外部環(huán)境接合的學(xué)科，這種接合是圍繞人來進(jìn)行的。“人”是設(shè)計(jì)界面的一個(gè)方面，是認(rèn)識(shí)的主體和設(shè)計(jì)服務(wù)的對(duì)象，而作為對(duì)象的“物”則是設(shè)計(jì)界面的另一個(gè)方面。它是包含著對(duì)象實(shí)體、環(huán)境及信息的綜合體，就如我們看見一件產(chǎn)品、一棟建筑，它帶給人的不僅有使用的功能、材料的質(zhì)地，也包含著對(duì)傳統(tǒng)思考、文化理喻、科學(xué)觀念等的認(rèn)知。“任何一件作品的內(nèi)容，都必須超出作品中所包含的那些個(gè)別物體的表象。”分析“物”也就分析了設(shè)計(jì)界面存在的多樣性。

為了便于認(rèn)識(shí)和分析設(shè)計(jì)界面，可將設(shè)計(jì)界面分類為：

1)功能性設(shè)計(jì)界面接受物的功能信息，操縱與控制物，同時(shí)也包括與生產(chǎn)的接口，即材料運(yùn)用、科學(xué)技術(shù)的應(yīng)用等等。這一界面反映著設(shè)計(jì)與人造物的協(xié)調(diào)作用。

2)情感性設(shè)計(jì)界面即物要傳遞感受給人，取得與人的感情共鳴。這種感受的信息傳達(dá)存在著確定性與不確定性的統(tǒng)一。情感把握在于深入目標(biāo)對(duì)象的使用者的感情，而不是個(gè)人的情感抒發(fā)。設(shè)計(jì)師“投入熱情，不投入感情”，避免個(gè)人的任何主觀臆斷與個(gè)性的自由發(fā)揮。這―界面反映著設(shè)計(jì)與人的關(guān)系。

3)環(huán)境性設(shè)計(jì)界面外部環(huán)境因素對(duì)人的信息傳遞。任何一件或一個(gè)產(chǎn)品或平面視覺傳達(dá)作品或室內(nèi)外環(huán)境作品都不能脫離環(huán)境而存在，環(huán)境的物理?xiàng)l件與精神氛圍是不可忽缺的界面因素。

應(yīng)該說，設(shè)計(jì)界面是以功能性界面為基礎(chǔ)，以環(huán)境性界面為前提，以情感性界面為重心而構(gòu)成的，它們之間形成有機(jī)和系統(tǒng)的聯(lián)系。

三、設(shè)計(jì)界面存在的方法論意義

當(dāng)機(jī)械大工業(yè)發(fā)展起來的時(shí)候，如何有效操縱和控制產(chǎn)品或機(jī)械的問題導(dǎo)致了人機(jī)工程學(xué)。二戰(zhàn)后，隨著體力的簡(jiǎn)單勞動(dòng)轉(zhuǎn)向腦力的復(fù)雜勞動(dòng)，人體工學(xué)也進(jìn)一步地?cái)U(kuò)大到人的思維能力的設(shè)計(jì)方面，“使設(shè)計(jì)能夠支持、解放、擴(kuò)展人的腦力勞動(dòng)”。在目前的知識(shí)經(jīng)濟(jì)時(shí)代，在滿足了物質(zhì)需求的情況下，人們追求自身個(gè)性的發(fā)展和情感訴求，設(shè)計(jì)必須要著重對(duì)人的情感需求進(jìn)行考慮。設(shè)計(jì)因素復(fù)雜化導(dǎo)致設(shè)計(jì)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)困難化。一個(gè)個(gè)性化的設(shè)計(jì)作品能否被消費(fèi)者所認(rèn)同?新產(chǎn)品開發(fā)能不能被市場(chǎng)所接受?在目前，我國(guó)大部分企業(yè)實(shí)力還并不強(qiáng)大，設(shè)計(jì)開發(fā)失利承受力還不很強(qiáng)的情況下，如何系統(tǒng)地、有根據(jù)地認(rèn)識(shí)、評(píng)價(jià)設(shè)計(jì)，使其符合市場(chǎng)，就需要對(duì)設(shè)計(jì)因素再認(rèn)識(shí)。利用界面分析法，正是使設(shè)計(jì)因素條理化，避免將人作為“生物人”的片面和走出籠統(tǒng)地說“設(shè)計(jì)＝科學(xué)十藝術(shù)”的簡(jiǎn)單誤區(qū)。

現(xiàn)代的人機(jī)工程學(xué)和消費(fèi)心理學(xué)為設(shè)計(jì)提供了科學(xué)的依據(jù)，它們的成功就在于實(shí)驗(yàn)、調(diào)查和數(shù)理表述，是較為可系的。同樣對(duì)設(shè)計(jì)藝術(shù)而言，進(jìn)行設(shè)計(jì)界面的分析，也要有生理學(xué)、心理學(xué)、文化學(xué)、生物學(xué)、技術(shù)學(xué)學(xué)科基礎(chǔ)。從理論上來說，它要直接建立在信息論和控制論的基礎(chǔ)之上。相對(duì)于機(jī)械、電子設(shè)計(jì)和人機(jī)設(shè)計(jì)，以往人機(jī)界面設(shè)計(jì)把握了技術(shù)科學(xué)的認(rèn)識(shí)和手段，忽視了人文科學(xué)觀念與思想。它的界面設(shè)計(jì)只能存在于局部的思考范圍內(nèi)，只成為一個(gè)設(shè)計(jì)的階段。

有人以功能論來評(píng)判設(shè)計(jì)?！肮δ軟Q定形態(tài)”曾是20世紀(jì)上半葉的設(shè)計(jì)格言，它的提法是片面的。這是因?yàn)椋旱谝?，功能不是單一的，它包括使用功能、審美功能、社?huì)功能、環(huán)境功能等。“過分追求單一的功能會(huì)導(dǎo)致將許多重要內(nèi)容(裝飾性、民族性、中間性)被排斥掉”。而且“有些內(nèi)容并不是‘功能’的概念所能包括了的，更何況物質(zhì)和精神的內(nèi)容也并不是時(shí)時(shí)處處等質(zhì)等量的融洽在一個(gè)統(tǒng)一體中，隨產(chǎn)品的不同、時(shí)期的不同，它們各自的主次地位也隨之變化”。在現(xiàn)今信息技術(shù)高度發(fā)展的時(shí)代，情感因素越來越成為設(shè)計(jì)的主要方面。物質(zhì)意義上的功能在保持其基礎(chǔ)地位的情況下，卻日益不能代表情感訴求的表述；第二，按“形態(tài)服從功能”而設(shè)計(jì)的產(chǎn)品，對(duì)于不熟悉它的使用者來說是難以理解的，產(chǎn)品要為人們所理解，必須要借助公認(rèn)的信碼，即符號(hào)系統(tǒng)；第三，滿足同一功能的產(chǎn)品形態(tài)本來就不是唯一的，象汽車等成熟的產(chǎn)品，年度換型計(jì)劃等措施成為商品經(jīng)濟(jì)中日益不可避免的現(xiàn)象。社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展到一定程度，才能出現(xiàn)設(shè)計(jì)的專業(yè)需求，而這時(shí)人們的基本物質(zhì)需求已能滿足，簡(jiǎn)單地以物質(zhì)來決定設(shè)計(jì)是不恰當(dāng)?shù)摹?/p>

相反，設(shè)計(jì)界面體現(xiàn)了人一物交流信息的本質(zhì)，也是設(shè)計(jì)藝術(shù)的內(nèi)涵，它包括了設(shè)計(jì)的方方面面，明確了設(shè)計(jì)的目標(biāo)與程序。

四、設(shè)計(jì)界面的分析

按照設(shè)計(jì)界面的三類劃分，有助于考察設(shè)計(jì)界面的多種因素。當(dāng)然，應(yīng)該說設(shè)計(jì)界面的劃分是不可能完全絕對(duì)的，三類界面之間有涵義上也可能交互與重疊，如宗教文化是一種環(huán)境性因素，但它帶給信仰者的往往更多的卻是宗教的情感因素。在這里環(huán)境性和情感性是不好區(qū)分的，但這并不妨礙不同分類之間所存在的實(shí)質(zhì)性的差異。

1、功能性界面

對(duì)功能性界面來說，它實(shí)現(xiàn)的是使用性內(nèi)容，任何‘件產(chǎn)品或內(nèi)外環(huán)境或平面視覺傳達(dá)作品，其存在的價(jià)值首要的是在于使用性，由使用性牽涉到多種功能因素的分析及實(shí)現(xiàn)功能的技術(shù)方法與材料運(yùn)用。在這一方面，分析思維作為一種理性思維而存在。如果作為一種處理方式來設(shè)計(jì)產(chǎn)品，則這種產(chǎn)品會(huì)使多種特征性(如民族性、純粹性)因素中性化，如果去除產(chǎn)品商標(biāo)，就很難認(rèn)出是哪國(guó)的或哪個(gè)公司的產(chǎn)品。當(dāng)然，這方面也說明了產(chǎn)品中存在著共同性因素，它使全人類能做出同樣的反應(yīng)。人的感覺和判斷能力有著國(guó)際性的、客觀性的特征。

功能性界面設(shè)計(jì)要建立在符號(hào)學(xué)的基礎(chǔ)上。國(guó)際符號(hào)學(xué)會(huì)對(duì)符號(hào)學(xué)所下定義是：符號(hào)是關(guān)于信號(hào)標(biāo)志系統(tǒng)(即通過某種渠道傳遞信息的系統(tǒng))的理論，它研究自然符號(hào)系統(tǒng)和人造符號(hào)系統(tǒng)的特征。廣義的說，能夠代表其他事物的東西都是符號(hào)，如字母、數(shù)字、儀式、意識(shí)、動(dòng)作等，最復(fù)雜的一種符號(hào)系統(tǒng)可能就是語(yǔ)言。設(shè)計(jì)功能界面，不可避免地要讓使用者明白功能操作。每一操作對(duì)人來說應(yīng)是符合思維邏輯的，是人性的，而對(duì)機(jī)械、電子來說則應(yīng)是準(zhǔn)確的、確定無疑的，這雙方的信息傳遞是功能界面的核心內(nèi)涵。

2、情感性界面

一個(gè)家庭裝飾要賦予人家居的溫馨，一副平面作品要以情動(dòng)人，一件宗教器具要體現(xiàn)信仰者的虔誠(chéng)。其實(shí)任何一件產(chǎn)品或作品只有與人的情感產(chǎn)生共鳴才能為人所接受，“敝帚自珍”正體現(xiàn)著人的感情寄托，也體現(xiàn)著設(shè)計(jì)作品的魅力所在。

現(xiàn)代符號(hào)學(xué)的發(fā)展也日益這一領(lǐng)域開拓，以努力使這種不確定性得到壓縮，部分加強(qiáng)理性化成分。符號(hào)學(xué)逐漸應(yīng)用于民俗學(xué)、神話學(xué)、宗教學(xué)、廣告學(xué)等領(lǐng)域，如日本符號(hào)學(xué)界把符號(hào)學(xué)用于認(rèn)識(shí)論研究，考察認(rèn)識(shí)知覺、認(rèn)識(shí)過程的符號(hào)學(xué)問題。同時(shí)，符號(hào)學(xué)還用于分析利用人體感官進(jìn)行的交際，并將音樂、舞蹈、服裝、裝飾等都作為符號(hào)系統(tǒng)加以分析研究，這都為設(shè)計(jì)藝術(shù)提供了寶貴與有借鑒價(jià)值的情感界面設(shè)計(jì)方法與技術(shù)手段。

3、環(huán)境性界面

任何的設(shè)計(jì)都要與環(huán)境因素相聯(lián)系，它包括社會(huì)、政治和文化等綜合領(lǐng)域。處于外界環(huán)境之中，“是以社會(huì)群體而不是以個(gè)體為基礎(chǔ)的”，所以環(huán)境性因素一般處于非受控與難以預(yù)見的變化狀態(tài)。聯(lián)系到設(shè)計(jì)的歷史，我們可以利用藝術(shù)社會(huì)學(xué)的觀點(diǎn)去認(rèn)識(shí)各時(shí)期的設(shè)計(jì)潮流。18世紀(jì)起，西方一批美學(xué)家已注意到藝術(shù)創(chuàng)造與審美趣味深受地理、氣候、民族、歷史條件等環(huán)境因素的影響。法國(guó)實(shí)證主義哲學(xué)家孔德指出：“文學(xué)藝術(shù)是人的創(chuàng)造物，原則上是由創(chuàng)造它的人所處的環(huán)境條件決定。”法國(guó)文藝?yán)碚摷业ぜ{認(rèn)為“物質(zhì)文明與精神文明的性質(zhì)面貌都取決于種族、環(huán)境、時(shí)代三大因素”。無論是工藝美術(shù)運(yùn)動(dòng)、包豪斯現(xiàn)代主義或20世紀(jì)80年代的反設(shè)計(jì)，現(xiàn)代的多元化，“游牧主義”(Nemadism)都反映著環(huán)境因素的影響。

環(huán)境性界面設(shè)計(jì)所涵蓋的因素是極為廣泛的，它包括有政治、歷史、經(jīng)濟(jì)、文化、科技、民族等，這方面的界面設(shè)計(jì)正體現(xiàn)了設(shè)計(jì)藝術(shù)的社會(huì)性。

以上說明了設(shè)計(jì)藝術(shù)界面存在的特征因素，說明在理性與非理性上都存在明確、合理、有規(guī)則、有根據(jù)的認(rèn)識(shí)方法與手段。

成功的作品都是完善地處理了這三個(gè)界面的結(jié)晶。如貝聿銘設(shè)計(jì)的盧浮宮擴(kuò)建工程，功能性處理得很好，沒有屈從于形式而損害功能；但同時(shí)又通過新材料及形式反映新的時(shí)代性特征及美學(xué)傾向，這是環(huán)境性界面處理的典范；人們觀看盧浮宮，不是回到古代，而是以新的價(jià)值觀去重新審視、欣賞，它的三角形外觀符合了人們的心理期望，這是情感性界面處理的極致。

五、設(shè)計(jì)界面的運(yùn)用原則

1)合理性原則，即保證在系統(tǒng)設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上的合理與明確。

任何的設(shè)計(jì)都既要有定性也要有定量的分析，是理性與感性思維相結(jié)合。努力減少非理性因素，而以定量?jī)?yōu)化、提高為基礎(chǔ)。設(shè)計(jì)不應(yīng)人云亦云，一定要在正確、系統(tǒng)的事實(shí)和數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行嚴(yán)密地理論分析，能以理服人、以情感人。

2)動(dòng)態(tài)性原則，即要有四維空間或五維空間的運(yùn)作觀念。一件作品不僅是二維的平面或三絕的立體，也要有時(shí)間與空間的變換，情感與思維認(rèn)識(shí)的演變等多維因素。

3)多樣化原則，即設(shè)計(jì)因素多樣化考慮。當(dāng)前越來越多的專業(yè)調(diào)查人員與公司出現(xiàn)，為設(shè)計(jì)帶來豐富的資料和依據(jù)。但是，如何獲取有效信息，如何分析設(shè)計(jì)信息實(shí)際上是一個(gè)要有創(chuàng)造性思維與方法的過程體系。

4)交互性原則，即界面設(shè)計(jì)強(qiáng)調(diào)交互過程。一方面是物的信息傳達(dá)，另一方面是人的接受與反饋，對(duì)任何物的信息都能動(dòng)地認(rèn)識(shí)與把握。

5)共通性原則，即把握三類界面的協(xié)調(diào)統(tǒng)一，功能、情感、環(huán)境不能孤立而存在。

六、設(shè)計(jì)界面的應(yīng)用方法

設(shè)計(jì)界面所包含的因素是極為廣泛的，但在運(yùn)用中卻只能有側(cè)重、有強(qiáng)調(diào)的把握。設(shè)計(jì)因素雖多，但它仍是一個(gè)不可分割的整體。它的結(jié)果是物化的形，但這個(gè)形卻是代表了時(shí)代、民族等方面的意識(shí)，并最終反映出人的“美”的心理活動(dòng)。

設(shè)計(jì)界面的運(yùn)用，核心是設(shè)計(jì)分析。在一些國(guó)際性的大公司，如索尼、松下、柯尼卡等，都有許多的成功案例可為借鑒。如柯尼卡公司設(shè)計(jì)其相機(jī)時(shí)，首先不是去繪制“美”的形和考慮技術(shù)的進(jìn)步，而是進(jìn)行對(duì)象人的日常行為分析，作出故事版(STORY)。它先假定對(duì)象人的年齡為35歲，名：xxx，從而分析他的家庭、喜好與憎惡，分析他的日常行為，進(jìn)而考察其人在什么場(chǎng)合需要僚機(jī)，從而為設(shè)計(jì)提供概念(CONCEPT)與目標(biāo)(TARGET)，進(jìn)行設(shè)計(jì)。經(jīng)過分析，設(shè)計(jì)師有了明確的概念與目標(biāo)，并隨信息的交互產(chǎn)生了創(chuàng)造力。

第7篇

①缺乏足夠科學(xué)正確的現(xiàn)代預(yù)算管理工作意識(shí)，對(duì)于全面預(yù)算管理工作的認(rèn)識(shí)不足以及不知道如何將全面預(yù)算管理真正應(yīng)用于實(shí)際成為阻礙全面預(yù)算管理工作有序開展的一大阻力。②在機(jī)構(gòu)建設(shè)方面也相對(duì)欠缺，沒有一個(gè)科學(xué)嚴(yán)密的管理機(jī)構(gòu)，各項(xiàng)管理工作也相對(duì)散亂不成體系，對(duì)于預(yù)算執(zhí)行過程中遇到的問題也無法在第一時(shí)間進(jìn)行有效溝通與對(duì)策制定，從而讓全面預(yù)算管理工作的推進(jìn)舉步維艱。③在全面預(yù)算的具體工作方面以及監(jiān)督約束方面的建設(shè)力度也相對(duì)較弱，影響了全面預(yù)算管理工作的健康開展。

二、推行全面預(yù)算管理的措施

（一）樹立科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)默F(xiàn)代管理意識(shí)

預(yù)算管理不是一個(gè)新鮮名詞，基于制定有效計(jì)劃確保資金得到更為有效利用的預(yù)算管理應(yīng)該是與現(xiàn)代社會(huì)共同形成與發(fā)展的。但是預(yù)算管理工作并不是一沉不變的，甚至可以說如果一直固守傳統(tǒng)和陳舊的預(yù)算管理工作意識(shí)及方法不僅無法確保管理工作能夠體現(xiàn)自身價(jià)值，甚至還會(huì)給機(jī)構(gòu)運(yùn)作造成嚴(yán)重阻礙。所以我們?cè)谕菩腥骖A(yù)算管理模式之前首先就要樹立起適應(yīng)全面預(yù)算管理工作有序開展的科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)默F(xiàn)代預(yù)算管理意識(shí)。所以現(xiàn)代預(yù)算管理意識(shí)是要將預(yù)算管理工作從財(cái)務(wù)管理的一個(gè)分支中劃分出來，要重視預(yù)算管理在機(jī)構(gòu)運(yùn)作過程中的全程監(jiān)控及深層次監(jiān)控，將過去那種事前預(yù)算事后決算的簡(jiǎn)單被動(dòng)管理模式轉(zhuǎn)化為全面管理、全部門管理的新型管理模式，這樣才能夠化被動(dòng)為主動(dòng)，切實(shí)發(fā)揮現(xiàn)代預(yù)算管理工作在機(jī)構(gòu)發(fā)展決策、全面管理工作中的突出作用。而這對(duì)于具有部門龐雜、人員眾多、資金需求量大的醫(yī)院來說，更為重要。在明確預(yù)算管理工作重要性以及全面預(yù)算基本概念的同時(shí)，還要加強(qiáng)全面預(yù)算相關(guān)知識(shí)的學(xué)習(xí)與掌握，不僅要加強(qiáng)具體預(yù)算管理人員的學(xué)習(xí)力度，對(duì)于醫(yī)院最高管理層、領(lǐng)導(dǎo)者來說相關(guān)學(xué)習(xí)也是非常必要的，只有這樣才能夠真正把全面預(yù)算管理的科學(xué)理念應(yīng)用于實(shí)際工作的引導(dǎo)與控制當(dāng)中，才能夠切實(shí)落實(shí)全面預(yù)算管理的理念與精神，才能夠?yàn)槿骖A(yù)算管理工作的有序開展?fàn)I造一個(gè)良好和諧的內(nèi)部環(huán)境。

（二）加強(qiáng)管理機(jī)構(gòu)建設(shè)

想要切實(shí)加強(qiáng)醫(yī)院的全面預(yù)算管理工作就必須建立專門化的管理機(jī)構(gòu)。全面預(yù)算管理機(jī)構(gòu)的工作不僅僅是進(jìn)行預(yù)算的編制與后續(xù)管理，更為重要的是要針對(duì)預(yù)算執(zhí)行過程中的相關(guān)問題進(jìn)行及時(shí)有效的討論研究，尋找解決問題的方法和途徑。全面預(yù)算管理機(jī)構(gòu)應(yīng)該由院長(zhǎng)牽頭并作為最高負(fù)責(zé)人，同時(shí)在吸納優(yōu)秀預(yù)算編制及管理人才的同時(shí)，還要加強(qiáng)與各科室、部門主要負(fù)責(zé)人的聯(lián)絡(luò)與交流，確保預(yù)算編制工作能夠切合醫(yī)院及各科室、部門的實(shí)際需要，這樣才能夠確保預(yù)算編制的科學(xué)性、合理性以及后續(xù)執(zhí)行的有效性。在機(jī)構(gòu)運(yùn)作的權(quán)利與義務(wù)方面也要進(jìn)行有效界定，一方面要確保機(jī)構(gòu)運(yùn)作的相對(duì)獨(dú)立避免遭受其他部門及科室的利益侵?jǐn)_，另一方面也要加強(qiáng)與其他科室及部門的有效溝通，爭(zhēng)取更多的認(rèn)同與配合，從而確保管理工作的有序開展。

（三）加強(qiáng)全面預(yù)算相關(guān)制度的建設(shè)

全面預(yù)算管理不僅僅應(yīng)該將工作的重點(diǎn)放在直接產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)效益和成本支出的醫(yī)療部門、藥品部門及住院部等。同時(shí)還要加強(qiáng)對(duì)日常辦公、后勤保障、安保防衛(wèi)等各個(gè)方面的預(yù)算管理覆蓋。因此加強(qiáng)全面預(yù)算管理制度建設(shè)不僅僅只是針對(duì)預(yù)算這一個(gè)點(diǎn)來開展，同時(shí)還要加強(qiáng)其他部分的制度建設(shè)。如加強(qiáng)藥品、醫(yī)療耗材采購(gòu)制度建設(shè)，大宗常規(guī)物品采用集中采購(gòu)模式，昂貴醫(yī)療設(shè)備及大型固定資產(chǎn)采用招投標(biāo)形式，一方面大力降低采購(gòu)成本，另一方面也能夠有效避免采購(gòu)人員與供應(yīng)商之間的暗箱操作。在固定資產(chǎn)管理方面要加強(qiáng)對(duì)固定資產(chǎn)的建檔及各環(huán)節(jié)的跟蹤記錄，從購(gòu)置、管理到使用以及使用成效和經(jīng)濟(jì)價(jià)值是否得到有效體現(xiàn)等都要進(jìn)行詳細(xì)記錄，確保固定資產(chǎn)得到最為有效的合理使用。在后勤保障制度建設(shè)方面，應(yīng)該利用服務(wù)外包的形式一方面轉(zhuǎn)嫁成本支出，另一方面讓醫(yī)院享受到更好更專業(yè)的優(yōu)質(zhì)服務(wù)?？傊?，只有將這些相關(guān)制度都進(jìn)行有效的建設(shè)與加強(qiáng)，才能夠確保全面預(yù)算管理制度體系的有效建立，實(shí)現(xiàn)全面預(yù)算管理工作的質(zhì)量提升。

（四）加強(qiáng)全面預(yù)算具體工作力度

在相關(guān)制度建設(shè)緊鑼密鼓展開的同時(shí)，全面預(yù)算管理工作的具體環(huán)節(jié)也要進(jìn)一步加強(qiáng)。首先要加強(qiáng)預(yù)算編制的合理性與科學(xué)性，要以醫(yī)院當(dāng)前發(fā)展及未來發(fā)展為基礎(chǔ)進(jìn)行零基礎(chǔ)預(yù)算編制方法，這樣不僅能夠確保預(yù)算編制能夠更加適應(yīng)醫(yī)院的自身發(fā)展，同時(shí)也能夠最大限度確保有效預(yù)算資金得到更加合理的利用，不過零基礎(chǔ)預(yù)算編制方法較傳統(tǒng)編制方法來說對(duì)預(yù)算編制人員提出了更高的要求，所以醫(yī)院也應(yīng)該大力加強(qiáng)預(yù)算編制人員的素質(zhì)提升，從而有效發(fā)揮零基礎(chǔ)預(yù)算編制的優(yōu)越作用。

（五）加強(qiáng)監(jiān)督約束機(jī)制建設(shè)