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作者：羅漢平 林少彬 陳欽明
【摘要】 目的 研究老年人上消化道出血的病因及臨床表現(xiàn)。方法 回顧分析我院2005年1月至2009年1月間收治的老年人上消化道出血120例的臨床特點，并與同期中青年病例90例進行比較。結果 本組老年人上消化道出血的病因為十二指腸潰瘍36例，胃潰瘍32例，肝硬化食管胃底靜脈曲張破裂出血14例，復合潰瘍12例，腫瘤14例，其他10例，2例未行胃鏡檢查自動出院，未能明確診斷。老年組復合潰瘍、胃潰瘍、腫瘤高于非老年組(P
【關鍵詞】 老年人 上消化道出血
上消化道出血(upper gastrointestinal hemorrage，UGH)是指屈氏韌帶以上的食管、胃、十二指腸和胃空腸吻合術后的空腸上段和胰、膽等病變引起的出血[1]，是消化內科的急癥。由于老年患者特有的身體特點，老年上消化道出血的原因、臨床表現(xiàn)及預后與青年患者有所不同。回顧性分析本院2005年1月至2009年1月共收治上消化道出血老年患者經(jīng)胃鏡確診者120例，現(xiàn)報告如下。
1 資料與方法
1.1一般資料 老年組120例患者，男76例，女44例，年齡60～81歲，平均72.6歲。非老年組90例患者，男56例，女34例，年齡22～57歲，平均42.7歲。所有患者根據(jù)嘔血、便血的臨床表現(xiàn)，大便潛血試驗陽性，全部病例均經(jīng)胃鏡或上消化道鋇餐透視檢查診斷確診，全部符合上消化道出血診斷標準，并排除下消化道出血。
1.2研究方法 比較老年人組與非老年組消化道出血原因。
1.3統(tǒng)計方法 SPSS軟件11.0。
1.4治療 本組主要采用內科保守治療，患者入院后均絕對臥床休息，通過補充血容量、輸全血或紅細胞懸液，靜脈應用質子泵抑制劑如奧美拉唑等。對于出血量大者可以使用垂體后葉素收縮內臟血管，降低門脈及側支循環(huán)壓力，如果有禁忌證可選用生長抑素類藥物如醋酸奧曲肽注射液(善寧)等。同時對合并慢性疾病者給予相應治療。經(jīng)內科治療48h后無效而且出血加重的患者可考慮進行手術治療。
2 結果
見下表
注：*為P
本組老年人上消化道出血的病因為十二指腸潰瘍36例，胃潰瘍32例，肝硬化食管胃底靜脈曲張破裂出血14例，復合潰瘍12例。腫瘤14例，其他10例，2例未行胃鏡檢查，自動出院，未能明確診斷。老年組復合潰瘍、胃潰瘍、腫瘤高于非老年組(P
3 討論
在老年人上消化道出血的病因中，仍以消化性潰瘍占首位，特別是胃潰瘍多見，十二指腸潰瘍所占比例明顯下降;而中青年組十二指腸潰瘍明顯多于胃潰瘍，與文獻報道一致[2]。老年人胃潰瘍增多的原因可能與老年人胃黏膜呈退行性變，血供不足致營養(yǎng)不良，分泌功能低下，使胃黏膜上皮細胞修復功能受損，胃黏膜屏障功能減退;胃黏膜的營養(yǎng)因子如胃泌素、表皮生長因子等的減少， 胃腔內H+濃度明顯增高會使其反彌散增多，胃黏膜屏障功能受損，致其防御能力減退有關[3，4]。同時，老年人動脈硬化等引起胃黏膜血流量減少，影響?zhàn)つさ脑偕迯鸵嗍瞧湓蛑弧＠夏耆顺Ｒ蚱渌膊￠L期服用非甾體類藥物，對胃黏膜有明顯損害，非甾體類藥物致胃腸出血可能與以下因素有關:① 抑制環(huán)氧化酶-1的活性，減少前列腺素的合成;②抑制血栓素A2的合成，使血小板聚集減少，誘發(fā)出血;③ 異常增多的白三烯及氧自由基對黏膜有毒性作用;④削弱胃黏膜屏障，影響上皮細胞的修復功能;所以老年人尤其是有胃腸疾病者應慎用非甾體類藥物，必要時可同時服用抑酸類藥或胃黏膜保護劑進行預防，警惕出血情況的出現(xiàn)。
急診胃鏡對上消化道出血的意義重大，不但可確定有無活動性出血，還可對選擇處理方法有指導意義[5]。急性胃黏膜病變診斷在急診胃鏡檢查前非常困難，因病變淺，能在短時間內愈合，應用常規(guī)胃鏡檢查難以發(fā)現(xiàn)這種病變，急診胃鏡開展使急性胃黏膜病變診斷率顯著提高。此外，急診胃鏡檢查對選擇處理上有指導意義，當發(fā)現(xiàn)出血病灶為癌腫引起者，需轉外科治療，但對急性胃黏膜病變多數(shù)用內科治療，可鏡下止血，如噴灑止血藥物凝血酶等，常能很快控制出血。老年人上消化道出血，特別是合并有其他疾病或由其他原發(fā)病所致者，故治療上應采取綜合治療措施，在病因診斷及治療的同時，應緊急處理上消化道出血。內科治療主要是補充血容量，控制出血和再出血，及時輸血輸液，以維持有效血液循環(huán)量。凡受體阻滯劑甲氰咪呱和立止血對老年上消化道出血可作為首選藥物，胃鏡下使用去甲腎上腺素冰鹽水灌洗后局部噴灑凝血酶療效肯定，值得在基層醫(yī)院推廣。
參 考 文 獻
[1]鄭芝田.胃腸病學.人民衛(wèi)生出版社，2006:301-307.
[2]黎忠信，鐘華志.1869例上消化道出血病因及相關因素分析.中華消化內鏡雜志，2001，8(1):19.
[3]葉任高，陸再英，謝毅等.內科學.人民衛(wèi)生出版社，2005:480.
【關鍵詞】 上消化道出血; 老年人;病因
上消化道出血(upper gastrointestinal hemorrage，UGH)是指屈氏韌帶以上的食管、胃、十二指腸和胃空腸吻合術后的空腸上段和胰、膽等病變引起的出血[1]，是消化內科的急癥。由于老年患者特有的身體特點，老年上消化道出血的原因、臨床表現(xiàn)及預后與青年患者有所不同。回顧性分析本院2007年1月至2009年1月共收治上消化道出血老年患者經(jīng)胃鏡確診者60例，現(xiàn)報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 本組60例患者，男38例，女22例，年齡60~81歲，平均72.6歲。60例患者根據(jù)嘔血、便血的臨床表現(xiàn)，大便潛血試驗陽性，全部病例均經(jīng)胃鏡或上消化道鋇餐透視檢查診斷確診，全部符合上消化道出血診斷標準，并排除下消化道出血。
1.2 臨床癥狀入院時有嘔血、黑糞和(或)便血，大便潛血陽性，排除來自口、鼻、咽部及呼吸道出血，其中黑便34例，嘔血8例，黑便+嘔血13例，便血7例。估計出血量1000 m12例， 4例患者出現(xiàn)失血性休克。22例在24 h內就診，其余多在3 d內就診。
1.3 治療方法本組主要采用內科保守治療，患者入院后均絕對臥床休息，通過補充血容量、輸全血或紅細胞懸液，靜脈應用質子泵抑制劑如奧美拉唑等。對于出血量大者可以使用垂體后葉素收縮內臟血管，降低門脈及側支循環(huán)壓力，如果有禁忌證可選用生長抑素類藥物如醋酸身曲肽注射液(善寧)等。同時對合并慢性疾病者給予相應治療。經(jīng)內科治療48 h后無效而且出血加重的患者可考慮進行手術治療。
2 結果
本組老年人上消化道出血的病因為十二指腸潰瘍18例，胃潰瘍16例，肝硬化食管胃底靜脈曲張破裂出血7例，復合潰瘍6例。腫瘤7例，其他5例，1例未行胃鏡檢查，自動出院，未能明確診斷。老年組復合潰瘍、胃潰瘍、腫瘤高于非老年組(P
3 討論
在老年人上消化道出血的病因中，仍以消化性潰瘍占首位、特別是胃潰瘍多見，十二指腸潰瘍所占比例明顯下降;而中青年組十二指腸潰瘍明顯多于胃潰瘍，與文獻報道一致[2]。老年人胃潰瘍增多的原因可能與老年人胃黏膜呈退行性變，血供不足致營養(yǎng)不良，分泌功能低下，使胃黏膜上皮細胞修復功能受損，胃黏膜屏障功能減退;胃黏膜的營養(yǎng)因子如胃泌素、表皮生長因子等的減少， 胃腔內H+濃度明顯增高會使其反彌散增多，胃黏膜屏障功能受損，致其防御能力減退有關[3，4]。同時，老年人動脈硬化等引起胃黏膜血流量減少，影響?zhàn)つさ脑偕迯鸵嗍瞧湓蛑?。老年人常因其他疾病長期服用非甾體類藥物，對胃黏膜有明顯損害，非甾體類藥物致胃腸出血可能與以下因素有關:① 抑制環(huán)氧化酶-1的活性，減少前列腺素的合成;②抑制血栓素A2的合成，使血小板聚集減少，誘發(fā)出血;③ 異常增多的白三烯及氧自由基對黏膜有毒性作用;④削弱胃黏膜屏障，影響上皮細胞的修復功能;所以老年人尤其是有胃腸疾病者應慎用非甾體類藥物，必要時可同時服用抑酸類藥或胃黏膜保護劑以進行預防，警惕出血情況的出現(xiàn)。
急診胃鏡對上消化道出血的意義重大，不但可確定有無活動性出血，還可對選擇處理方法有指導意義[5]。急性胃黏膜病變診斷在急診胃鏡檢查前非常困難，因病變淺，能在短時間內愈合，應用常規(guī)胃鏡檢查難以發(fā)現(xiàn)這種病變，急診胃鏡開展使急性胃黏膜病變診斷率顯著提高。此外，急診胃鏡檢查對選擇處理上有指導意義，當發(fā)現(xiàn)出血病灶為癌腫引起者，需轉外科治療，但對急性胃黏膜病變多數(shù)用內科治療，可鏡下止血，如噴灑止血藥物凝血酶等，常能很快控制出血。老年人上消化道出血，特別是合并有其他疾病或由其他原發(fā)病所致者，故治療上應采取綜合治療措施，在病因診斷及治療的同時，應緊急處理上消化道出血。內科治療主要是補充血容量，控制出血和再出血，及時輸血輸液，以維持有效血液循環(huán)量。凡受體阻滯劑甲氰咪呱和立止血對老年上消化道出血可作為首選藥物，胃鏡下使用去甲腎上腺素冰鹽水灌洗后局部噴灑凝血酶療效肯定，值得在基層醫(yī)院推廣。
參 考 文 獻
[1] 鄭芝田.胃腸病學.人民衛(wèi)生出版社，2006:301-307.
[2] 黎忠信，鐘華志.1869例上消化道出血病因及相關因素分析.中華消化內鏡雜志，2001，8(1):19.
[3] 葉任高，陸再英，謝毅，等.內科學.人民衛(wèi)生出版社，2005:480.
【關鍵詞】新課標；對策；學習方法
新課改后初、高中課程標準對學生的要求層次不同。九年義務教育中的初中化W作為學生的啟蒙學科，主要要求學生掌握簡單的化學知識、生產(chǎn)上的某些應用，其知識層次以要求學生“知其然”為主。而高中化學是在九年義務教育的基礎上實施的較高層次的基礎教育，化學知識逐漸趨向系統(tǒng)化、理論化，要求學生對所學習的化學知識有相當一部分不但要“知其然”而且要“知其所以然”。
一、高一學生化學學習的現(xiàn)狀
初中化學較好的高一學生也會出現(xiàn)這樣一個問題“初中化學考90多分，為什么高中化學學習越來越吃力”。主要表現(xiàn)在以下方面：
1.化學概念模糊和未建立微粒觀
概念教學是很多老師都會采用的教學方式，但是教學過程中很多同學都不會理解化學的概念。例如化學計量是很多同學在學習高一化學容易出現(xiàn)問題的地方，特別很多學生對“物質的量”理解方面存在很大的問題，把單位mol和物質的量混淆，不能理解“一定數(shù)目粒子集合體”的概念，把其處理為“一堆”，而是認為是“一個一個”。物質的量是高中化學中重要的概念，是聯(lián)系宏觀與微觀的橋梁作用?；瘜W計量在實驗中的計算這部分，很多同學在初中化學中未形成“微粒觀”，不知道物質微觀下還有哪些粒子，不能準確理解氧化還原反應的實質和離子反應的實質，以至于在后面化學方程式的書寫出現(xiàn)很大的問題。
2.學生的分析解題能力差
高一化學經(jīng)常會有大量綜合性的理解性的考題，不再是初中化學那種更多只要記住就會的題。例如有些的圖示計算題、實驗綜合題中實驗流程圖的考查等，就需要學生不僅要有一定的審題能力，還需要綜合分析能力、快速發(fā)現(xiàn)題眼的能力。而初中化學更側重于知識的識記，對解題能力要求不高。由此可見，進入高一化學學習的學生還不具備這樣的解題能力。
二、高一學生化學學習的現(xiàn)狀的成因
通過分析高一學生化學學習現(xiàn)狀，究其原因很多。比如有的是初中化學只有一年的學習時間，難度不大，沒有經(jīng)過系統(tǒng)性的學習，掌握不牢。對于一些經(jīng)過系統(tǒng)有步驟方法的學習的學生對化學學習還是不適應。其主要原因如下：
1.學生的基礎知識欠缺
初中化學課程主要安排在初三一學年，加上中考，學業(yè)緊張，所以很多老師更多的是針對考點進行講解練習，以至于很多學生初三化學沒有入門，更多的是記憶。特別是化學是在原子、分子水平上研究物質的組成、結構、性質及其應用的一門基礎自然科學。更多的是微觀上研究物質，這對于初中學生對事物的認識僅僅是宏觀上，不能很好的從微觀上進行理解性的掌握。
2.學生的自主學習能力不夠
高一新生的化學知識零散，沒有系統(tǒng)，表面化，不知道“為什么”，也缺乏學習高中化學知識應具有的學習方法與思維方式，學生抽象思維的能力較差。這就要求了學生要有課前預習，課后總結歸納知識點和規(guī)律的習慣，掌握學習方法，形成自己的學習方法，做到舉一反三，觸類旁通。
3.化學學習的進度安排不合理
初高中教師因為教學內容的難易和課時安排等各方面的問題，在化學教學上還是存在很大差異，而這些差異又將直接影響學生的化學學習成績。課時少，內容多，所以教學進度快。這樣很大一部分學生前面知識都沒有弄清楚，再學習新內容，很容易失去學習化學的興趣。
三、改善高一學生化學學習現(xiàn)狀的策略
高一化學的學習對于以后化學學科的學習有很大的影響，而且高一學生化學的低效的問題應該結合其綜合特征進行處理。其策略如下：
1.提高教師個人專業(yè)素養(yǎng)
由于某些主、客觀原因，大多數(shù)學校的教師，彼此對對方教學要求了解甚少，造成初、高中教師各自為政，互不交流的尷尬局面。使得教師在教材知識結構的完整性方面先天缺失。這就需要高中化學教師對初中教材進行學習，掌握學生的學習基礎，在以后的教學設計上能夠有利于銜接。這樣在后面的教學中可以促使學生理解化學知識、建立相關化學概念。
2.提高學生自主學習能力 增強學生解自信心
學生是學習的主體，提高學生的主動學習的能力非常重要。教師應該讓學生養(yǎng)成課前預習和課后小結鞏固的習慣，能夠將零碎的、知識量多的知識進行總結。學生認為化學難學的原因很大的程度上是因為受初中化學學習方法的影響，還是以記背為主，很少去分析思考知識的實質。很多學生還未形成微粒觀，不能去理解物質的量、氧化還原反應離子反應的實質。所以教師可以將微粒觀設計在教學中，讓學生潛移默化的加深對微粒觀的理解?；瘜W的實驗是許多學生的興趣所在，可以利用實驗激發(fā)學生的興趣。還可以在教學中穿插些化學史，激勵學生去探索化學的魅力。
四、結語
在教學中，教師要注重學生的能力培養(yǎng)，指導他們掌握正確的學習方法，使其將初中知識更好地過渡到高中知識中，對化學知識產(chǎn)生濃厚的興趣，不斷地提高學習水平，并為今后的化學知識的學習奠定良好的基礎。
【參考文獻】
一、中學生化學反應三重表征的困難
1不能從微觀水平上理解化學反應
相關文獻綜述表明，很多研究者對學生是否在分子水平上理解了化學反應進行了探查。研究發(fā)現(xiàn)，學生即使能正確配平化學方程式，也不能在微觀上理解化學反應，這可能與用數(shù)學化的方式配平化學方程式有很大關系。國外對這個問題的探查多是結合畫微粒圖和訪談等方法進行的。例如，蓋貝爾（Gabel等設計了14個題目來考查大學生對事物微觀本質的理解情況。題目用不同大小和形狀的圓圈來描述分子、原子，要求學生在物質發(fā)生物理或化學變化后再畫一幅新的圖畫。分析結果令人吃驚：第一，有50%的學生忽視了微粒守恒和微粒的排列次序；第二，盡管學過化學的學生比沒學過化學的學生回答得要好，但這種差別并不顯著。這表明，盡管化學課程在一定程度上涉及物質的微觀本質，但通過微觀本質的學習并沒有使學生較好地理解化學。另外，學生的回答中普遍出現(xiàn)的錯誤有：（1當液體變成氣體時，原子被畫大，而不是原子間的距離變大；（2用線條表示液體的水平面，而不是用頂層的微粒來暗示表面；（3氣體分子排列有序；（4在分子分解之后，仍用完整的單位來描述微粒，而不是用更小的原子等單元表示。這表明，盡管化學課程在一定程度上涉及物質的微觀本質，但通過微觀本質的學習學生并沒有較好地理解化學。再如，亞洛克Yarroch要求成績中等以上的高二學生配平給出的化學方程式，并根據(jù)方程式畫出微觀圖像，以探查學生對化學方程式的理解。結果顯示，60%的學生能夠配平化學方程式卻不能解釋方程式的意義。這說明學生沒有從微觀水平上理解化學反應。
可以看出，學生不能像化學家那樣進行微觀表征，對學生而言，微觀表征復雜而抽象，這可以從學生對原子結構、化學反應、溶液等特定內容存有_定的相異構想中窺見_二。在過去的三十年里，文獻中關于化學相異構想的研究可謂數(shù)不勝數(shù)，其中相當部分的內容就集中在微觀表征上，這就反映出學生在微觀表征方面的困難。對于化學反應，學生也存在這樣的困難。
(二不理解化學方程式的符號含義
化學方程式既可以表征宏觀水平的物質變化，也可以表征微觀水平上的粒子行為，符號表征指向的這種模糊性提供了_種思維轉換的流動性，即借助于符號表征，思維可以很方便地在宏觀表征和微觀表征間轉換，這為交流和傳播解釋提供了強有力的工具。符號表征在任何時刻都具有特定的含義，這在專家看來是非常明確的，但對于學生而言，怡怡是符號表征指向的模糊性增加了學生的認知負擔，學生必須能利用上下文和背景知識來明確符號表征的指向。
化學方程式隱含著豐富的信息，對化學方程式的理解也包含著多重含義：明確化學式和各個數(shù)字及箭頭的含義、理解化學反應過程中鍵的斷裂和形成、考察化學變化的定量關系等。研究發(fā)現(xiàn)，學生對化學方程式的理解存在困難。如，桑格MJ.Sanger)讓學生根據(jù)微粒圖書寫化學方程式，他發(fā)現(xiàn)44%的學生對下標和系數(shù)的理解有不同程度的混淆，有的學生將C3書寫成3C,學生只知道下標表示某分子中的原子個數(shù)，卻不知道下標可以表示組成物質的元素比例；約翰斯頓Johnstone等人研究發(fā)現(xiàn)，離子方程式中沒有參與反應的離子、氧化數(shù)和離子電荷給學生造成了最大的障礙；巴克（Bark〗探查德國學生對鎂條燃燒的理解，他對八、九、十年級的272名學生進行了測驗，結果顯示，30%的學生能正確寫出反應方程式，并能正確進行微觀表征，70%的學生只能記住方程式而不能正確理解其微觀含義，巴克由此得出結論，單純使用化學符號不能幫助學生理解化學反應。
三難以在不同表征水平間進行轉換
化學概念在本質上是多重表征的，成功的化學學習應該建構三重表征的整體模型，在三重表征之間實現(xiàn)思維的自由轉換?，F(xiàn)已公認化學教學經(jīng)常包含宏觀表征和微觀表征間的轉換，用微觀表征解釋可觀察的宏觀現(xiàn)象，然而對學生而言，這種不同表征間的轉換是困難的，這不僅因為微觀世界的抽象本質，還因為對學生來說轉換本身可能就是挑戰(zhàn)。教師與學生在知識和經(jīng)驗背景方面存在鴻溝，教師已經(jīng)能很流暢、很容易地實現(xiàn)不同表征間的思維轉換，而學生對物質不是很熟悉，當這種轉換發(fā)生時，學生可能會經(jīng)歷激烈的認知沖突才能實現(xiàn)。作為宏觀水平和微觀水平中介的符號水平不僅增加了學生學習的復雜性，而且由于它指向的模糊性，增加了初學者在宏觀表征和微觀表征間討論的困惑。
已有大量研究發(fā)現(xiàn)，很多學生能正確回答談話性的測試題目，然而進一步測試表明，他們不是真的理解了概念，很多學生能夠解決計算問題，而不能解決概念性問題。例如，研究發(fā)現(xiàn)，學生成功配平化學方程式并不能保證他們能用圖表的形式準確表征相應的化學反應。[8]我們對這一發(fā)現(xiàn)的解釋是，能夠配平化學方程式是符號水平的理解，然而畫微粒圖的能力是微觀水平的理解，學生在聯(lián)系兩種表征水平方面存在困難，難以實現(xiàn)不同表征水平間的思維轉換，因此不能成功地解決問題。再如，對于化學平衡，即使是高等化學專業(yè)的學生也存在三重表征轉換的困難。研究發(fā)現(xiàn)，食鹽溶于水，達到平衡狀態(tài)即飽和時，很多學生會認為反應結束了，即將“平衡”等同于“結束”。這說明學生對平衡的動態(tài)性缺乏理解，無法建立宏觀表征與微觀表征的聯(lián)系。還有很多學生認為，當溶液達到平衡時，化學方程式左邊的物質數(shù)目就等于右邊的物質數(shù)目，換句話說，學生經(jīng)常將化學反應中的理解為“等于”，即如果達到化學平衡就意味著反應物濃度等于生成物濃度。這種相異構想可能緣于等號的應用，也說明學生沒有將符號表征和宏觀表征、微觀表征建立起聯(lián)系。
專家可以在三重表征之間隨意轉換，而且可能是自發(fā)進行的，而學生的三重表征轉換就困難得多。盡管如此，由于三重表征提供了科學概念不同水平上的信息，對概念理解是極其重要的，學生應努力建構起三重表征的內在聯(lián)系，增進對科學概念的理解。
二、中學生化學反應三重表征困難產(chǎn)生的原因
從學生自身角度來看，三重表征困難的一個原因是，學生的思維受到他們已有的宏觀經(jīng)驗的強烈影響，從而無法理解微觀表征，如，_滴水里含有大量的水分子，這些分子竟然在不斷運動著，這對于初學者來說很難接受；第二個原因是，他們有限的概念性知識和貧乏的空間想象能力，導致學生經(jīng)常不能將_種表征轉化為另_種表征。
本文主要討論化學反應三重表征困難產(chǎn)生的外部因素，這是因為外部因素可以在教學實踐中進行可行性設計，對教學實踐更有啟發(fā)意義。
1微觀世界的抽象性
微觀表征關注的世界是一個不可視的世界，只能通過想象來觸及。由于學生已有的知識經(jīng)驗有限，缺乏空間想象能力，對微觀粒子的表征就很困難，很容易將宏觀性質直接遷移過去，如，認為微觀粒子有顏色、是連續(xù)的、有生命、不同狀態(tài)下質量不同大小可變等。由于缺乏宏觀經(jīng)驗的支持，學生的微觀表征就顯得異常困難。盡管存在各種模型和動畫模擬等可視化教學的幫助，但大量研究顯示，學生對微觀世界的理解還是存有大量的相異構想，過去二十年間化學教育文獻的研究熱點就是對學生相異構想的探查，其中相當部分的內容集中在微觀表征上，由此可見，學生微觀表征的困難程度。
現(xiàn)代化學的重要特征之_，就是將微觀粒子間的相互作用模型作為解釋理論的基礎，這些粒子帶有科學猜想的性質。對學生來說，粒子這個詞有_定的誤導性，學生可能把糖和鹽的細粒當作教師提到的粒子，而不是相當小空間水平內的假定粒子。這些微觀水平上的粒子是分子、原子和電子等等，這些粒子存在空間如此之小以致量子效應（對可以直接觀察的粒子來說是微不足道的變得非常顯著，這些“量子物質”擁有屬性的方式和我們熟悉的宏觀粒子擁有屬性的方式有很大不同，它是解釋化學的微粒模型的一個有力證據(jù)。量子物質不是堅硬的難以穿透的有鋒利邊緣的實體，而是帶有量子規(guī)則模型化了的屬性的很多模糊區(qū)域。對化學反應宏觀表征的解釋都是借助于這些微觀粒子的行為來解釋的，在科學上，微粒模型具有真實的和重大的解釋價值。
眾所周知，這種微觀表征模型的使用對許多學生來說具有很大的挑戰(zhàn)性，他們不能完全理解量子物質顯著不同于熟悉的宏觀粒子屬性，學生通常采用一種虛假的解釋，這可能與中學生理解科學模型和科學本質的水平有限有關系，即使是大學生也可能沒有形成有效思考微觀世界所需的心智模型?。
(二教材編制的局限性
教材的編制和內容呈現(xiàn)具有1定的局限性，這嚴重影響了學生化學反應三重表征的建構。
首先，教材對有些知識的論述不是很明確，如，對原子的論述就是典型的例子。沒有人能說明原子是什么或者原子像什么，雖然通過原子級顯微鏡我們看到了金色的原子1個挨著_個一但是原子級顯微鏡的輸出結果是它自己的模型應用的結果。很多教科書回避了原子是或像什么這個尷尬問題，只給出了關于原子性質的論述，那么，學生很容易認同教材中畫出的原子圖像就是原子本來的樣子。對化學反應過程的描述也存在類似的局限性。
其次，文本、圖表或圖形的使用存在問題。如，教材中有的圖是這樣畫的：在一燒杯水中僅畫了幾個液態(tài)水分子，這會使得學生認為_燒杯水中只含有那么多個水分子，而這種理解在學生看來是很自然的，因為他們看到的就是這樣，和宏觀經(jīng)驗是吻合的。在印刷的紙張上不能描繪一燒杯水中大量的水分子，這是文本編制與生俱來的問題。如果文本不對此作出說明或解釋，那么，學生就很容易產(chǎn)生相異構想。
再次，教材內容不能很好地體現(xiàn)微粒的立體性和化學反應的動態(tài)性?；瘜W微粒是立體的，化學反應是動態(tài)的，但是落實到教材文本中，只能以二維的和靜態(tài)的方式呈現(xiàn)，這是教材文本印刷難以克服的局限性。
三化學符號的復雜性
符號表征包含著大量的信息，初學者對其理解起來非常困難，對于化學反應更是如此。我們通常用化學方程式來表征_個化學反應，這個方程式里內含著大量的信息，包括_些抽象的概念，如元素、化合價、電負性、化學反應、能量等，還包括_些普適性的書寫規(guī)則，如分子式的書寫規(guī)則、方程式的配平規(guī)則、離子式的書寫規(guī)則等。化學符號本身就是人為表征的，因此，對學生而言，它更像是_些無意義的音節(jié)，要熟記這些復雜的符號系統(tǒng)，的確是非常困難的。更何況，化學符號表征的還是-些學生本身就覺得學習困難的知識。
為了使符號表征有意義，教師必須花費大量時間讓學生熟知符號的含義，熟練掌握化學方程式的書寫規(guī)則，從一開始就注重從三重表征的角度建構符號表征的意義。符號表征的意義在于，它是一種非常有利的交流工具，_旦建構起正確的符號表征，就會便利我們快速地、有效地交流，并有助于我們在三重表征間的思維轉換。
因此，在教授符號表征的時候，教師應清晰地認識到：（1和專家相比，學生的符號表征能力不如專家有效；（2使用符號表征的方式可能增加感知的復雜性和任務認知需求的復雜性；（3考慮化學符號指向對象是否是模糊的，如果真是這樣，要明確符號在任1點元素、物質、分子、原子等上的含義，注意方程式中符號使用的貫性。
四化學三重表征教學的困難性
化學教育的一個難題是，宏觀表征模型本質上是連續(xù)性的，而微觀表征模型本質上是分離的，如，氣體的流動宏觀來看是連續(xù)的，而從微觀本質上看氣體分子的行為是分離的。建立宏觀表征和微觀表征的聯(lián)系需要理解微觀世界的粒子是極小的。對于“粒子”微?！边@樣的主題詞，學生早就接觸過，因此，學生會借助已有的理解解釋微觀世界中的粒子行為。教師如果不注意聯(lián)系學生的已有經(jīng)驗，借助于宏觀表征和微觀表征的聯(lián)系進行教學，很容易造成學生理解上的困惑。
如，對于化學反應的判斷標準是有新物質的產(chǎn)生，對于什么是新物質是從微觀水平上進行判斷的，是我們應用了微觀模型的結果。而從可觀測的宏觀表征上來看，新物質就是明顯不同于原來的物質，對于學生來講，冰融化為水也是_種新物質，盡管在化學上它們具有相同的結構，但宏觀來看，物理變化產(chǎn)生的新物質就像1些化學反應產(chǎn)生的新物質那樣引人注目。很多化學方程式對于學生判斷是化學變化還是物理變化是有幫助的，因為它們可以揭示物質的微觀粒子的行為，但文獻顯示，也有很多化學方程式對于學生的判斷幫助不大。如，對于碳酸鈣加熱生成氧化鈣和二氧化碳的反應而言，很多學生不認為這是1個化學反應，因為碳酸鈣沒有和任何物質反應。另外，一些學生將加熱看作是1種物質，認為碳酸鈣和熱發(fā)生了反應。這可能是曰常生活中“反應”的意思對理解化學術語的不利影響。
有研究者總結了化學教學導致三重表征的困難表現(xiàn)為三方面：（1化學教學中教師簡單強調符號表征和問題解決而不重視宏觀現(xiàn)象和微觀表征的聯(lián)系；（2化學教學中教師不能很好地結合宏觀、微觀和符號表征，使學生長時記憶中的信息分散零亂，不能系統(tǒng)全面地對化學知識進行理解；（3片面、機械地強調宏觀、微觀和符號三種表征，而不能夠將其與學生的曰常生活聯(lián)系在_起，學生無法達到深刻的理解。
五化學方程式配平的數(shù)學化
對于中學階段化學反應的學習而言，熟練配平化學方程式是學生要達到的一個重要學習目標。為了實現(xiàn)這_目標，教育工作者研究了很多方法幫助學生熟練配平方程式，其中很多方法就是借助于數(shù)學或計算機程序。如，布拉克利Blakley證明了幾乎每-個化學方程式都能用線性代數(shù)的Fotoan程序配平。盡管用數(shù)學的方法能正確地配平化學方程式，但正如科爾布Kib所說，反應物和產(chǎn)物在化學上真的是不同的物質，化學方程式不像一個數(shù)學表達式，因此，它們不能在數(shù)學的感覺上等同起來，忽略數(shù)學上和化學方程式之間的細微差別增加了概念性錯誤的可能性。?已有研究表明，學生即使正確地配平了化學方程式，他們也不一定理解已配平的化學方程式的含義。用數(shù)學方式配平化學方程式導致了學生對化學反應本質的忽略，從而導致了學生的很多相異構想的產(chǎn)生。出于對這種狀況的反思，很多研究者認為，教師要幫助學生理解化學方程式的意義，讓學生學會用化學的方式正確配平化學方程式。目前，國外在這方面的研究大都集中在探查學生配平化學方程式過程中出現(xiàn)的錯誤及其相關教學建議上。
國內有關配平化學方程式的教學研究主要是總結化學方程式配平的方法，或針對某類特定的化學反應方程式的配平進行具體研究，[14]目前，我國化學教學中仍然隨處可見各種各樣配平的口訣?？梢哉f，我國在配平化學方程式的教學上，許多教師并不以理解化學反應為基礎，而是以數(shù)學的方式配平，訓練學生配平技巧的成分很大。如此導致的結果是，學生可能會用數(shù)學化的方法配平化學方程式，但不理解化學方程式所代表的含義，從而出現(xiàn)對化學方程式本質的理解困難。
【關鍵詞】 高血壓 趨化因子 單核細胞 基因表達 逆轉錄聚合酶鏈反應 酶聯(lián)免疫吸附測定
原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）是常見的心血管疾病，也是導致心腦血管疾病的重要危險因素。近年來，越來越多的學者認為EH是一種與遺傳、環(huán)境、代謝極為相關的復雜疾病[1～3]，當EH與其他相關危險因素并存時，單純的血壓控制只能使不到60%的患者獲益，而危險因素的干預才能獲得更大的益處。因此，積極探討EH的發(fā)病機制及其影響因素，對更有效的控制EH，減輕其危害已成為醫(yī)務工作者的共識。有學者研究發(fā)現(xiàn)，炎癥可能在EH的發(fā)病機制中起著重要的作用[4]，2007年2月～12月實驗檢測EH患者外周血單核細胞趨化因子1（monocyte chemotactic protein1，MCP1）蛋白水平及單個核細胞MCP1 mRNA的表達，探討外周血MCP1的變化與EH的關系。
1 對象與方法
1.1 對象及分組
按《中國高血壓防治指南（2005年修訂版）》[5]制定的標準，選取心血管科住院和門診新診斷或未經(jīng)正規(guī)降壓治療的EH患者62例，同時選取血壓正常的30例健康體檢者作為對照組。排除繼發(fā)性高血壓、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血癥、感染、嚴重肝腎疾病、自身免疫性疾病及腫瘤性疾病，排除近期有手術或外傷史等影響MCP1的因素。
1.2 方法
1.2.1 主要試劑和儀器 人淋巴細胞分離液（上海捷瑞），Trizol試劑（美國Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞興），逆轉錄試劑盒（Promega），PCR試劑盒（Promega），100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker（天根生化），人MCP1 ELISA 試劑盒（美國R＆D公司）；ULT13863三洋-80 ℃低溫冰箱(日本)，5745臺式冷凍離心機(德國)，Eppendorff centrifuge 5810R 高速離心機，Amersham核酸蛋白分析儀，PCR儀（PE geneAmp PCR System 2400）（Perkin Elmer），DNA成像分析儀（Gel Doc EQ，BioRad），酶標儀（ELx800，BioTek公司）。MCP1引物設計由上海生工合成，上游引物5' AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG 3'，下游引物5' – AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG 3'；βaction：上游引物5'AGCGAGCATCCCCCAAAGTT 3'，下游引物5'GGGCACGAAGGCTCATCATT 3'。
1.2.2 標本采集 受檢者空腹12 h，于次日清晨6∶00～7∶00采集肘正中靜脈血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室溫靜置2 h，自然凝固后予離心10 min，1 000 r/min收集上清液置于-80℃冰箱保存待測；另4 ml置于EDTA抗凝試管中搖勻后即刻置40 ℃冰箱冷存，于6 h內提取RNA用。
1.2.3 外周血MCP1蛋白含量測定 用保存待測的血清，依照MCP1 ELISA試劑盒說明書的步驟操作。用酶標儀檢測450 nm波長下各孔吸光度，根據(jù)吸光度值計算標本中MCP1的濃度。
1.2.4 人血單個核細胞中RNA提取和逆轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR） 淋巴細胞分離液提取外周血中單個核細胞后，按照說明書的步驟提取總RNA；按逆轉錄試劑盒說明書步驟合成cDNA，并用PCR技術擴增目的片段，PCR產(chǎn)物用1.5% 瓊脂糖凝膠跑電泳，溴乙錠顯色。測定各條帶灰度值，以βactin為內參，用MCP1與βactin的灰度比值定量MCP1。
1.2.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析處理，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。
2 結果
2.1 一般資料
EH組及對照組的一般資料見表1。兩組研究對象的年齡、性別、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、空腹血糖和外周血白細胞比較，無統(tǒng)計學差異。表1 EH組及對照組的基本資料注：TC示總膽固醇，TG示甘油三酯，F(xiàn)BG示空腹血糖，LDL示低密度脂蛋白，HDL示高密度脂蛋白，WBC示白細胞。
2.2 MCP1水平及MCP1 mRNA表達
見表2。與對照組比較，EH組外周血MCP1蛋白水平及單個核細胞MCP1mRNA表達均顯著增高（P＜0.01)。表2 外周血MCP1水平及單個核細胞MCP1mRNA表達注：（1）與對照組比較， P＜0.01。
3 討論
EH是最常見的心血管疾病之一。傳統(tǒng)觀念認為，EH是多種因素引起的血液流變學異常，表現(xiàn)為心搏出量和（或）外周阻力增加，治療目標也僅限于用藥物控制血壓。隨著對EH發(fā)病機制的深入研究，發(fā)現(xiàn)在EH發(fā)生發(fā)展的不同階段，血管炎癥是一個主要的、共同的病理特征，提示EH與炎癥關系密切[6]。
MCP1為堿性蛋白，屬于趨化因子超家族，可由炎癥介質刺激的單核-巨噬細胞、淋巴細胞、成纖維細胞、內皮細胞及平滑肌細胞分泌。MCP1在體內及體外均有強大的誘導單核-巨噬細胞聚集、附壁、游走的功能，是炎癥的始動因子及標志[7]。研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性高血壓患者外周血MCP1蛋白含量升高，認為EH可能是一種慢性炎癥過程[8]。本研究顯示，EH患者外周血MCP1蛋白水平顯著升高，提示MCP1可能參與了EH的病理生理過程。因此，積極探索控制炎癥的方法可能是高血壓乃至冠心病具有前景的治療策略之一。
EH患者外周血MCP1升高的機制尚不十分明了，可能來源于與內皮細胞、血管平滑肌細胞等上調表達MCP1 mRNA有關，但外周血MCP1蛋白的升高是否與外周血單個核細胞中MCP1 mRNA表達上調有關尚未見報道。本研究顯示，與對照組比較，單純EH組外周血單個核細胞中MCP1 mRNA表達顯著增高，提示外周血單個核細胞的MCP1 mRNA表達上調可能是導致EH患者外周血MCP1蛋白含量升高的一個因素，但是否與內皮細胞等其它因素有關，需進一步實驗證實。由于MCP1蛋白可能進一步激活CCR2趨化因子受體，介導趨化活性，使單核細胞和巨噬細胞發(fā)生移行，黏附于血管內皮細胞，進一步損傷血管內皮[9]，使其產(chǎn)生更多的炎癥因子，加速血管重構，使血管壁順應性下降，從而使血壓升高。因此，針對炎癥的治療，或許對控制血壓有一定意義。
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【摘要】 目的 對亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)基因進行克隆、表達和免疫學初步研究。方法 將亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1克隆到原核表達質粒pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL-21/DE3中用異丙硫代-β-D半乳糖苷誘導表達，表達產(chǎn)物通過十二烷基磺酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定，用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化，用蛋白印跡法(Western blotting)進行免疫學分析。結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果均表明重組質粒pET-28a(+)-EF-1構建成功。重組蛋白可被感染了亞洲牛帶絳蟲患者血清和豬血清識別，表明其具有免疫反應性。結論 亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1基因可在原核表達系統(tǒng)中獲得具有免疫學活性的表達，為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎。
【關鍵詞】 亞洲牛帶絳蟲；延伸因子-1；基因克??；原核表達
ABSTRACT: Objective To clone and express the novel gene named elongation factor 1 (EF-1) of Taenia saginata asiatica in order to analyze the immunogenicity of the recombinant protein. Methods By screening the full length cDNA plasmid library， the coding region of EF-1 was amplified with PCR， and cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then expressed in E.coli BL21 with IPTG induction. The recombinant protein was detected by SDS-PAGE and purified by Ni-IDA affinity chromatography， and its immunogenicity was analyzed by Western blotting. Results PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant expression plasmid was successfully constructed. Western blot analysis of EF-1 recombinant protein testified that the recombinant protein could be recognized by immunizing the serum of swine and patient， therefore indicating its immunogenicity. Conclusion A novel gene coding EF-1 of Taenia saginata asiatica was cloned and expressed successfully. The purified protein of EF-1 will be of importance for further research on the biological function of the gene.
KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; elongation factor 1(EF-1); molecular cloning; prokaryotic expression
亞洲牛帶絳蟲(Taenia saginata asiatica)是近30年來發(fā)現(xiàn)的一種成蟲形態(tài)與牛帶絳蟲相似，而囊尾蚴卻與豬囊尾蚴相似并以豬作為中間宿主的人體帶絳蟲。2006年我們在前期研究的基礎上進一步系統(tǒng)地開展對亞洲牛帶絳蟲在分類地位、分子診斷和疫苗等方面的研究［1-4］，為制定預防人體帶絳蟲病策略提供依據(jù)。本研究從亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA質粒文庫中篩選出一個延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)的同源基因，構建了pET-28a(+)-EF-1原核表達載體，并對其原核表達產(chǎn)物進行了初步的免疫學研究，為進一步研究其生物學功能奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 血清來源
感染亞洲牛帶絳蟲豬血清由貴陽醫(yī)學院寄生蟲學教研室提供，患者血清采自亞洲牛帶絳蟲流行區(qū)貴州省都勻市米秀鄉(xiāng)，健康人血清由中山大學熱帶病重點實驗室提供。
1.1.2 文庫、質粒、菌株
蟲體標本采自亞洲牛帶絳蟲流行區(qū)貴州省都勻市米秀鄉(xiāng)，亞洲牛帶絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建、EST測序及Unigene 分析與上海聯(lián)合基因有限公司合作完成。原核表達質粒pET-28a(+)和大腸桿菌BL-21/DE3由中山醫(yī)學院病原生物學實驗室保存。
1.1.3 主要試劑和工具酶
Ex Taq酶(含dNTP)、EcoRⅠ、XhoⅠ、T4 DNA連接酶及DNA標準(DL2000)均購自大連寶生物工程公司；異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)購自美國Promega公司；Ni-IDA Agarose(cat No：69670)購自美國Novagen公司；蛋白分子量標準購自立陶宛MBI公司；DNA凝膠回收試劑盒、質粒純化試劑盒購自北京賽百盛基因公司；辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬IgG二抗、DAB(3，3二氨基聯(lián)苯胺)顯色試劑盒均購自武漢博士德有限公司；PVDF膜購自Millipore公司；TMB顯色試劑盒購自美國BD公司；SDS、丙烯酰胺、亞甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸胺、尿素等試劑均購自上海申友生物科技公司。
1.1.4 引物合成和DNA測序
基因擴增引物和重組質粒DNA測序由Invitrogen上海生物技術有限公司合成。
1.2 方法
1.2.1 EF-1基因的識別
將獲得的亞洲牛帶絳蟲unigene進行Blastx分析，獲得編碼亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因文庫質粒編號為T.a HC23-E9，GenBank登錄號為EF420501的同源基因；并通過瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)(ExPASY， ca.expasy.org/)預測其理化特性。
1.2.2 EF-1基因的擴增 根據(jù)已獲得的EF-1編碼序列，利用DNAClub和PCRdesign設計引物。上游引物：CTAGAATTCATGGAGTGTGCGTTGAAGTTC，帶EcoRⅠ酶切位點；下游引物：GGGCTCGAGTTACAATTTGTTGAAGGAAG，帶XhoⅠ酶切位點。以亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA文庫中EF-1基因的克隆質粒為模板，94 ℃預變性5 min后，熱循環(huán)參數(shù)為94 ℃ 1 min，57 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共35個循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物10 g/L瓊脂糖凝膠電泳回收。
1.2.3 重組原核表達質粒［pET-28a(+)-EF-1］的構建及鑒定
將PCR產(chǎn)物和原核表達質粒pET-28a(+)經(jīng)EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切后回收，連接、轉化大腸桿菌BL-21/DE3感受態(tài)細胞，卡那霉素篩選陽性克隆。對陽性克隆提取質粒進行PCR、雙酶切和測序鑒定。
1.2.4 重組蛋白的表達
將確定能表達重組蛋白的單菌落接種于5 mL LB培養(yǎng)基中，過夜培養(yǎng)后1∶100轉接到1 000 mL培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至A600約為0.6時加入IPTG至終濃度為1 mmol/L，28 ℃、250 r/min進行誘導。誘導4 h后離心收菌，用SDS-PAGE檢測蛋白質的表達。
1.2.5 菌體的裂解、重組蛋白可溶性判斷及待純化融合蛋白上清的制備
取單菌落接種于1 000 mL含卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37 ℃震蕩培養(yǎng)至A600為0.6時，加入IPTG使其終濃度為1 mmol/L，28 ℃震蕩培養(yǎng)4 h，4 ℃離心(6 000 g×10 min)，收集菌液，按文獻［5］的方法，每克菌(濕重)加入3 mL裂解緩沖液，重懸細菌沉淀，裂解液冰上超聲破碎(160 W，超聲1 s，停2 s，超聲5 min)，4 ℃ 13 000r/min離心20 min，收集上清和沉淀，分別取上清10 μL加入4×SDS上樣緩沖液和沉淀微量加1×SDS上樣緩沖液，煮沸5-10 min后行150 g/L SDS-PAGE判斷重組蛋白的可溶性。
1.2.6 尿素變性純化重組蛋白
在得到的包涵體(超聲后沉淀)中加入A液10 mL重懸，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，棄上清，重復2次，再用B液洗滌1次，4 ℃ 6 000 r/min離心15 min。將洗滌后的包涵體沉淀加入8 mol/L尿素(溶于基礎液)18 mL放置1 h左右，沉淀完全溶解，溶液清亮透明。采用透析法，逐步降低尿素濃度(8-6-5-4-3-2-1 mol/L PBS溶液)。
1.2.7 Western blotting檢測重組蛋白的免疫反應性
將純化的蛋白進行120 g/L SDS-PAGE電泳，使用電轉移儀于100 V冰浴轉印1.5 h，將蛋白轉移至PVDF膜上，將含預染蛋白Marker條帶剪下，PVDF膜轉入感染亞洲牛帶絳蟲豬和患者血清中(1∶100稀釋)，室溫孵育2 h，PBS洗滌3次，每次5 min。然后加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬和抗人IgG(1∶2 000稀釋)，室溫孵育1 h，PBS洗滌3次，每次5 min，DAB顯色至出現(xiàn)目的條帶，超純水終止反應［6］。
2 結 果
2.1 生物信息學分析
該基因與細粒棘球絳蟲EF-1基因(登錄號為AAF641192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%；全長988 bp，編碼區(qū)67-868，編碼269個氨基酸。理論分子質量和等電點分別是28 067.8 u和4.88［7］。
2.2 原核重組質粒的鑒定
將重組質粒進行PCR和雙酶切鑒定，產(chǎn)物進行10 g/L瓊脂糖凝膠電泳。結果顯示在500-1 000 bp之間有一清晰的條帶，與目的基因的大小基本相符，證明重組質粒構建成功(圖1)。
2.3 蛋白表達純化結果
將構建好的重組質粒轉化到E.Coli BL-21/DE3中表達，SDS-PAGE電泳分析結果如圖2中第4、5泳道所示，大約在34 ku左右處出現(xiàn)表達條帶，與目的蛋白分子量基本相符。通過破包涵體，將蛋白進行純化，結果如圖2中第6、7泳道所示，其位置與目的蛋白相符，證明目的蛋白純化成功。
2.4 Western blotting鑒定
感染亞洲牛帶絳蟲的豬血清以及感染亞洲牛帶絳蟲的患者血清對純化蛋白的Western blotting均顯示出清晰的條帶(圖3)。
3 討論
研究表明，EF-1是一種在細胞內普遍存在且大量表達的多聚體核糖體蛋白質，在基因表達、翻譯過程中起重要作用［8］。EF-1可能由α、β、γ、δ四個亞基組成，其中EF-1α屬于G蛋白家族，它和氨酰tRNA、GTP一起組成復合體，通過正確地識別mRNA上的密碼子和tRNA上的反密碼子，負責轉運氨酰tRNA 到80S核糖體，并具有低水平GTP酶的活性。EF-1β具有鳥苷酸交換活性，在EF-1α從核糖體離開并且構象由GDP形式變成GTP準備與新的AA-tRNA相互作用的過程中，需要EF-1β作為催化劑。EF-1γ常與EF-1β形成復合物，具有增加后者鳥苷酸交換的功能。至少在脊椎動物中，EF-1還有第四個亞基EF-1δ，尤其在其羧基端與EF-1β具有同源性，而在氨基端無同源性，表明它們可能具有不同的功能［9-10］。我們從亞洲牛帶絳蟲cDNA文庫中識別出了一個EF-1的全長編碼基因，其編碼的氨基酸序列與GenBank中細粒棘球絳蟲的EF-1基因 (登錄號為AAF64192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%，推測其為亞洲牛帶絳蟲EF-1基因，并且含有完整的開放閱讀框，是一個全長cDNA序列。
通過生物信息學分析，該蛋白的理論分子質量為28 067.8 u，而質粒pET-28a(+)的載體標簽序列的分子質量為6 ku，所以重組蛋白的分子質量大約應為34 ku。圖2的4泳道顯示的重組蛋白條帶與預期的大小是一致的，并且條帶很濃，但從該圖的5泳道看出上清沒有表達，說明該蛋白是以包涵體的形式表達，通過尿素變性純化重組蛋白，得到了條帶很濃的純化蛋白(圖2第7泳道)。本研究為包涵體蛋白的純化積累了經(jīng)驗，同時還證實了重組蛋白在純化后具有免疫反應性，獲得了具有免疫活性的重組蛋白，為進一步研究其生物學功能以及在診斷尤其是疫苗研究方面的作用奠定了基礎。
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關鍵詞：感知力；成長；和諧
一、調查的緣起
由于當前應試教育仍占據(jù)各中學的主要空間，在升學壓力的作用下，教師和學生處于很緊張的狀態(tài)下，無法釋懷，因此中學階段出現(xiàn)抑郁、自殺等心理疾病，這已經(jīng)成為了一種較為普遍的社會現(xiàn)象。在當下，學校的引導、希望和學生的喜愛、需求之間形成了不小的差異、錯位、誤讀。2007年筆者進行了大學校園音樂文化的調查研究，研究過程中發(fā)現(xiàn)，大學生音樂知識的缺失及音樂文化的偏頗及音樂注意力的淡漠和中學音樂教育有著直接的關系。就中學而言，無論是學校對學生進行的音樂知識教育或者是舉辦的各種面向學生的音樂活動都相對較少，學校的教師對學生究竟需要什么樣的音樂、喜歡什么樣的音樂也并不了解，教師和學生缺乏必要的溝通，更談不上對學生的音樂審美趣味進行正確的引導了，二者之間出現(xiàn)了不小的“斷層”。中學階段音樂文化的斷層已成為了當代大學生人生經(jīng)歷中缺失，大部分大學生對音樂文化的關注點不夠，因此，筆者非常想關注一下目前中學的校園音樂文化狀況，并從音樂教育角度提出自己的一些想法，目前關心中學校園音樂文化的并不多，本文全當拋磚引玉，于是就有了開始的調查。
二、研究方法與對象
為了反映出河北省中學校園音樂文化的現(xiàn)狀，本次研究采用問卷調查和訪談相結合的方法。對河北省石家莊市、衡水市、張家口市、保定市四市共12所中學1008名在校高中學生發(fā)放問卷，共發(fā)放問卷1008份，收回980份，問卷回收率達98%。調查范圍與對象主要是河北省部分市區(qū)高中，其中石家莊市二所：二十四中、河北師大附中；衡水市五所：衡水市第六中學，衡水市第十三中學，衡水市桃城區(qū)彭杜鄉(xiāng)中學，衡水市安平縣第二中學，河北省阜城縣第二中學；張家口市三所：蔚縣職教中學、萬全中學、張北一中；保定市兩所：易縣中學、博野中學。調查對象為高中生，年級不限，男女不限。就河北省而言，大部分地區(qū)處于不太發(fā)達地區(qū)，農(nóng)村人口居多，本次調查從發(fā)達地區(qū)選擇兩所中學，其余都是較為貧困的市縣中學，因此本調查較能反映出河北省整體中學校園音樂現(xiàn)狀。
三、調查結果與分析
（一）調查結果統(tǒng)計
本調查問卷分為三部分，主要針對中學校園音樂文化，從關于音樂、關于校園音樂、關于音樂課三方面進行自行命卷調查的，調查結果如下：
在調查中學生喜歡什么樣的音樂時，21.3%的同學選擇古典音樂，75.1%的同學選擇流行音樂，12.6%的同學選擇民族音樂。同樣在平時聽什么樣的音樂方面，流行音樂占83.1%，不聽音樂的同學占6.4%。在選擇收聽方式方面，專門到音樂廳的占不到1%，從沒去過音樂廳的占93.5%。聽音樂的途徑靠網(wǎng)絡下載占89.3%，買光碟占7.1%，5.3%的基本不聽。在喜歡的歌星調查中，港臺歌手占63.2%，網(wǎng)絡歌星占32.3%，大陸歌星占6.8%。在音樂能否調整情緒方面，92%認為音樂能調整情緒，0.1%認為不能，0.6%認為沒感覺。
關于校園音樂方面，有校園廣播的占72.3%，沒有校園廣播的占20.7%。校園經(jīng)常播放什么樣的音樂方面，24.8%的學生認為流行歌曲，47.3%學生認為學校播放中學生歌曲。在有無校歌一欄調查中，5.2%的學生認為學校有校歌，64.9%同學認為該校沒有校歌，30.1%的同學不知道有無校歌。關于學校鈴聲2.5%的同學認為該校鈴聲很好聽，51.4%的同學認為鈴聲一般，43.1%的同學認為鈴聲很難聽，很刺耳。
關于音樂課方面，87.1%的同學認為該校有音樂課，5.4%的學生認為沒有音樂課。對音樂課的態(tài)度問題上，80.8%的同學喜歡上音樂課，4.1%的同學不喜歡上音樂課，17.2%的同學無所謂。在學習掌握音樂知識方面，15.5%的學生認為音樂知識來源于音樂課，46.3%同學認為音樂知識不是來源于音樂課，41.2%認為大部分來源于音樂課。在音樂技能掌握上，36.4%同學認識五線譜，51.9%的同學不認識，13.7%的同學知道一點。對于樂器學習和掌握方面，37.2%學過一種樂器，59.7%沒學過，4.1%會多種樂器。
從以上調查數(shù)據(jù)（來源于本課題組的調查數(shù)據(jù) ）中可以看出，目前河北省中學整體校園音樂文化總體情況不容樂觀，在音樂審美方面，學生們對流行音樂的盲目追求，對網(wǎng)絡音樂的夸大跟隨，對民族音樂的缺失，對古典音樂的勉強認可，都證明了目前中學生沒有形成基本的審美標準和判斷能力，盲從和追星成為了他們的時尚；對音樂的漠然和校園文化環(huán)境的冷漠，反映出中學生認知能力和評價能力的稚嫩，甚至很多同學不知道學校是否有廣播和有無校歌。在校園活動的認可方面，一半左右的同學不太喜歡參加活動，也有部分同學無所謂，只有很少的同學希望并愿意參加學校組織的各種活動。對他們來說；對音樂課的態(tài)度及音樂的熱愛，都遠遠低于正常水平，就連發(fā)達地區(qū)學生，專門到音樂廳聽音樂會的寥寥無幾，很多學生對音樂持無所謂態(tài)度，聽什么無所謂，聽誰的歌無所謂，這也是不容忽視的。但是，調查也表明學生內心對音樂還是有追求的，大部分同學認為音樂能排解心理壓力，并承認音樂的功能，但在現(xiàn)實中沒有很好利用音樂這一功能而已。
（二）構建和諧中學校園音樂文化的理論依據(jù)
所謂“校園文化是一種精神，是一種氛圍，是引導人激勵人的一種內在動力?！雹佟Ｐ@音樂文化是將“音樂作為一種文化來認識，通過提高學生對音樂的認知，提高學生的審美意識，讓學生在熏陶和實踐中感悟、體驗、表達、認識和理解音樂，將校園音樂植根于校園文化背景中，把音樂教育深深扎根于多元文化土壤里，創(chuàng)設一個自主和諧的人文文化氛圍，以釋放人的價值?！雹诙谛@文化建設中，培育良好的音樂文化，營造一個有濃郁而浪漫的音樂園文化氛圍，對于提高學校學生綜合素質，促進學校音樂教育的發(fā)展，將起著不容忽視的作用。
我國偉大的音樂教育家賀綠汀一直認為基礎音樂教育對于培養(yǎng)青少年良好的素質修養(yǎng)能起到很大的作用，因此應加強青少年的音樂基礎教育。他指出，“中小學音樂教育又是關系到整個后代文化修養(yǎng)、思想境界和道德品質的大事”。③在人的諸多素質中，審美是全面發(fā)展的人所必備的素質，而實現(xiàn)審美教育的主要途徑就是通過包括音樂教育在內的學校教育。自從2001年教育部制定了《全日制義務教育音樂課程標準》后，“以音樂審美為核心的基本理念，在潛移默化中培育學生美好的情操和健全的人格”更成為了各中學素質教育的有力依據(jù)。可以說，培養(yǎng)良好的道德情操和健全的人格成為了目前中學素質教育的核心。
據(jù)調查顯示，受過良好音樂教育的人的一生，精神大多平和，生活也相對較少波動，對待挫折有較強的承受能力，這使他們的情感宣泄和情感歸宿更具合理性，能成為社會中穩(wěn)定的因素。尤其接受嚴肅音樂教育的人，穩(wěn)定特質更為明顯。前蘇聯(lián)著名教育家蘇霍姆林斯說：“進行音樂教育的目的，不是培養(yǎng)音樂家，而是培養(yǎng)和諧的人?！?/p>
德國教育家第斯多惠認為，人是一個整體，一個完整的統(tǒng)一體，人的精神和身體息息相關，人的身體影響精神，精神影響身體，身體的變化引起精神的變化，而精神的變化會引起身體的變化。精神與身體的和諧，就是人格的統(tǒng)一與和諧。這兩個方面同等重要，互相依存。
四、構建河北省中學校園音樂文化的目標體系
（1）以基礎音樂教育為切入點，適當增加流行音樂元素，提升中學生感知想象能力。
從調查中得知，目前中學生對音樂的感知能力極為淡漠，每天生活在校園里卻有30.1%的同學不知道學校有無校歌，也有不少同學不知道校園廣播在播什么音樂。在音樂課的開設方面，17.2%的同學也持有無所謂的態(tài)度。因此，可以說音樂在某些學生眼里是可有可無，即使存在也聽不見的狀態(tài)。這令人悍然的“不知道”“不關心”是長期“應試教育”磨練結果還是同學已經(jīng)沒有了“審美需求”和“審美感受”？如果是前者還好，我們可以通過教育主管部門的努力進行改善，而如果是后者呢？當我們的學生已喪失了對“美的追求”，我們還能輕而易舉的改變現(xiàn)狀嗎？著名的美國作曲家、教育家赫伯特齊佩爾博士認為“學習音樂不僅僅是為了藝術，為了娛樂，而是為了訓練頭腦、發(fā)展身心，在這方面，音樂是非常重要的”④。在中學階段，音樂課堂仍然是學生獲得音樂知識和音樂技能的最主要的方式和手段，因此，音樂課堂教學內容及形式直接影響中學生音樂素養(yǎng)的形成和感知能力的提高。
在調查中我們發(fā)現(xiàn)，中學生對流行音樂情有獨鐘，但是在中學音樂課本上涉及流行音樂內容的很少，這不僅僅是因為學生的欣賞趣味被流行音樂的廣泛傳播所吸引，更重要的是學生欣賞的方向沒有得到誘導和樹立，盡管每個學生都在上課時接觸了音樂課堂中的古典音樂和民族音樂，但他們不認為自己體驗到了欣賞的愉悅。相反，課外音樂欣賞的特點具有自發(fā)性、零散性和隨意性，它沒有外在的壓力，沒有約束，一切都是在自由的狀態(tài)下作出的自發(fā)選擇，因此 ，筆者建議在基礎音樂教育中引入一些流行音樂元素作為教學內容，比如節(jié)奏型的培養(yǎng)方面，流行音樂具有極強的節(jié)奏感。提升中學生學習音樂的興趣，然后加入一些古典音樂及民族音樂，逐漸培養(yǎng)學生對音樂的感受能力。假如我們仍在音樂課堂上缺乏對學生音樂欣賞審美趣味的引導及對鑒賞能力的培養(yǎng)和重視，那當然很難喚起學生高雅的音樂審美趣味了?！兜聡魳方逃耪摗分刑岬剑骸暗聡胀▽W校音樂課的基本準則之一就是培養(yǎng)學生從各種媒介挑選音樂的能力，以便音樂更好地融進個人的生活世界中……”⑤這讓我們認識到，我們進行音樂教育時忽略的恰恰就是怎樣培養(yǎng)學生學會一輩子與音樂打交道的本領，忽略了提高國民審美意識和藝術修養(yǎng)以興趣作為基點的原動力。普通中學生長時間沒有真正接觸音樂，了解音樂和感受音樂的機會，不但造成他們音樂知識的匱乏，最可怕的是生活中沒有音樂意識和習慣，他們的感悟能力會逐漸下降，對音樂的敏感度降低甚至喪失了最起碼的音樂體驗，造成審美能力的降低。因此，中學音樂課堂要正確引導中學生欣賞流行音樂，加大力度宣傳古典音樂，民族音樂等高雅音樂，使中學生對音樂的選擇更多元化。
（2）以良好的校園音樂文化氛圍為關注點，體現(xiàn)人文關懷，釋放人的價值。
《新課標》明確指出“學校的廣播站、電視臺、網(wǎng)站是音樂教育的一個重要資源，也是建設校園精神文明的窗口之一，應配合音樂課堂教學，經(jīng)常播放健康向上的音樂，拓寬學生的音樂文化視野，形成良好的校園文化氛圍”⑥。從調查中發(fā)現(xiàn)，大部分學校校園廣播以播送好人好事、重要通知、尋物啟事等為主，偶爾播放音樂也是以流行音樂為主，并且沒有什么章法而言，學生們并不能從光比重獲得課堂以外的音樂知識及高品位的音樂作品。
在調查中我們也驚喜地發(fā)現(xiàn)，有些學校校園文化還是很豐富。比如筆者在河北師范大學附屬實驗中學調查時發(fā)現(xiàn)，這所學校每天的上課鈴聲很悅耳，一些名曲都成為了上下課的鈴聲，比過去的單調的鈴聲更讓學生感到舒心快樂。課間操音樂更是新奇，選用邁克杰克遜的《Smooth criminal》《Beat it》，這些作品很適合中學生的審美取向，同時也是流行樂壇的經(jīng)典，因此更能讓學生時時關注校園音樂，感覺在校園生活很溫暖。
同時在學校組織音樂活動方面的調查中，很多學生表示愿意參加學校組織的活動，也有很多學生認為學校組織這樣的活動很少。因為被調查對象都是高中生，在高考升學壓力的重壓下，很多同學似乎與各種學校活動的距離很遠，在調查中發(fā)現(xiàn)，有些高中有音樂特長班的同學認為，學校應該多舉行這樣的活動，也表現(xiàn)出強烈的參加欲望，其他同學漠然的態(tài)度令人深思。德國教育家說過“真正的教育從不奢望每個人都能成為有真知灼見、深思遠慮的思想家”⑦，而應該使“教育過程首先是一個精神成長過程，然后才成為科學獲知的一部分”。⑧因此，創(chuàng)建良好的校園文化氛圍，是從中學生全面發(fā)展談起的。
（3）將成長作為中學生身心健康的關鍵點，構建和諧、健康的校園音樂文化氛圍。
中學生的年齡一般都在14-18歲之間，“這段時期正是青少年生理、心理、思維、意識快速發(fā)展階段，也和認識活動、情感活動、意志活動及個性品德形成的劇烈變動期，生理上成熟時他們產(chǎn)生陳人敢，在心理上他們也盡快希望進入成人世界，有著強烈的獨立意識，渴望社會、老師、家長尊重他們和信任他們”⑨在調查中很多學生認為音樂可以調節(jié)人的情緒，因此在這一個心理較為敏感的階段，如果不正確引導，很容易影響他們的健康成長。如果學校的音樂文化氛圍較濃，學生的身心都可以在緊張的學習之余得到放松，心靈得到安慰，從內心中可以產(chǎn)生堅強、博愛、豁達、樂觀的信念?？梢运茉熘袑W生良好的個性和較為健全的人格。學生在校園中體驗的是心靈的自由和解放，行為的安定有序。良好的校園音樂文化，不是控制和約束，而是促進學生的成長并賦予其可持續(xù)發(fā)展的能力，為學生提供充滿關心、尊重、友愛、和互助的環(huán)境，使學生能自由創(chuàng)造、自我超越、自尊、自強和自立，使學生在良好的校園氛圍中獲得德行的發(fā)展。
和諧作為中國傳統(tǒng)文化的精髓，體現(xiàn)的是安定有序、融洽協(xié)調，和諧的校園音樂文化是一種實踐活動，它不是脫離學生生活的，而是與學生的學習、生活和諧相融的重要組成部分，蘊藏著潛移默化點滴滲透的重要育人功能。學校應充分開發(fā)利用校園文化的教育資源，提供和諧的立體的教育服務，為學生搭建展現(xiàn)風采的人生舞臺，營造學習、實踐、體驗、發(fā)展創(chuàng)新的時間和空間。學生可以在各種活動中認識自我，在管理中調節(jié)自我，在學習生活中完善自我，養(yǎng)成寬容、謙和地對待他人,和諧地對待自然和社會的人格素養(yǎng)。通過各種活動，激發(fā)學習興趣和求知欲望，挖掘學生潛能和創(chuàng)造力，培養(yǎng)學生創(chuàng)新精神和實踐能力，中學教育要為學生創(chuàng)造一種和諧的音樂文化氛圍，從課程設置、課堂教學、課外活動和社會實踐各個方面入手，將教學、活動和音樂文化的構建有機地結合起來。
注釋：
①馬曉紅.構建和諧校園文化之音樂教育，《職教與成教》
2006（12）P391頁
②李占秀，王麗娜.構建大學校園音樂文化的原則和目標體
系，《河北師范大學學報》哲社版 2009（1）P157頁
③《賀綠汀.我對中小學音樂教育的希望》[C].《賀綠汀音
樂論文選集》(二).上海:上海音樂出版社, 1989: 196.
④沈建軍.《音樂與科學》[M].上海音樂出版社1989 年P74頁
⑤謝嘉幸，楊燕宜，孫海.《德國音樂教育概況》[M].上海
教育出版社，P38頁
⑥《中華人民共和國教育.全日制義務教育音樂課程標準
（實驗稿）》[M].北京師范大學出版社，2001年 P 14頁
⑦[德]亞斯貝爾斯.《什么是教育》[M].上海：三聯(lián)書店
1991年P3-4頁
⑧同上P30頁
⑨朱紅芳.當前中學生心理問題成因及對策探析[J].《產(chǎn)業(yè)與
科技論壇》2009（4）P202
作者簡介：
1.李占秀，碩士研究生，河北師范大學音樂學院副教授 碩士生導師，研究方向：聲樂教學與音樂教育。
2.姚宏偉，河北師范大學學生處，副教授，研究方向 大學生心理教育。
