時間：2022-04-01 20:42:55
序論：在您撰寫提取工藝論文時，參考他人的優(yōu)秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，引導(dǎo)您走向新的創(chuàng)作高度。
此工藝采用醇提法進(jìn)行，生產(chǎn)過程中使用的酒精需要回收并循環(huán)使用，其具體工藝流程為：首先將原藥材進(jìn)行預(yù)處理后，投入到提取罐中，加入一定量酒精回流提取，然后收集提取液；提取液再經(jīng)過濃縮器進(jìn)行濃縮，將濃縮液進(jìn)行噴霧干燥后即制成中間體。物料衡算是設(shè)備選型的依據(jù)，決定生產(chǎn)空間大小，在物料衡算基礎(chǔ)上進(jìn)行合理生產(chǎn)安排，是防止多品種生產(chǎn)時產(chǎn)生交叉污染的基本手段之一。進(jìn)行物料衡算之前，首先應(yīng)了解車間的年生產(chǎn)任務(wù)、生產(chǎn)班制、每班工作時間以及年生產(chǎn)時間等，根據(jù)計(jì)算可以得出此工藝原材料消耗量以及每個階段中間品的產(chǎn)量，最后選擇適合生產(chǎn)能力的設(shè)備（提取罐、濃縮設(shè)備、干燥設(shè)備等）進(jìn)行匹配。
2平面布局工藝設(shè)計(jì)
以某中藥提取車間為例，根據(jù)提取車間的自身特點(diǎn)，將車間平面設(shè)計(jì)成矩形，這樣便于工藝設(shè)備的合理布置，便于安排通道及出入口，且能提供較多自然采光和自然通風(fēng)的墻面。
2.1垂直布局設(shè)計(jì)，節(jié)省占地面積，合理利用空間
從整體布局上考慮，以提取罐為中心，采用垂直布局模式，將整個車間分為3層（局部有4層），第1層主要由酒精回收間、出渣間以及公用工程房間組成，第2層主要為前處理間、提取操作間及生產(chǎn)輔助間，第3層為噴霧干燥區(qū)（D級潔凈區(qū)），主要進(jìn)行浸膏處理操作。提取車間所使用的酒精回收裝置尺寸較大，高度較高，因此將酒精回收單元分3層布置，第1層布置酒精回收釜，第2層布置酒精儲罐，第3層夾層布置冷凝器、冷卻器等。在提取與出渣的設(shè)計(jì)上也采用垂直布局的方式，將提取操作區(qū)與出渣區(qū)分層布置，一方面保證出渣口的高度，便于藥渣的清除和轉(zhuǎn)運(yùn)，另一方面減少出渣操作對整個生產(chǎn)區(qū)的污染。
2.2人、物流分開設(shè)置，避免交叉污染
物流主入口設(shè)在東側(cè)，靠近前處理區(qū)，原藥材通過貨梯運(yùn)至第2層切斷、凈制、挑揀間進(jìn)行前處理，然后至提取操作間進(jìn)行提取，提取液經(jīng)濃縮、噴霧干燥后制成中間體。如此將人、物流分開設(shè)置，有利于避免造成污染和混淆。
3工藝管道布置
提取車間的工藝管道包括提取罐料液自循環(huán)管道、提取液輸送管道、濃縮液輸送管道、酒精輸送管道等。提取車間的工藝管道布置在符合GMP要求的前提下進(jìn)行設(shè)計(jì)。管道設(shè)計(jì)可以采用明敷方式，以減少投資，并有利于安裝、操作和檢修。設(shè)計(jì)時，盡量做到管線短捷，管道必須有交叉和拐彎時，應(yīng)避免產(chǎn)生死角和盲管等。圖3為某提取車間的工藝管道布置圖，提取設(shè)備、泵以及儲罐分別沿南北兩側(cè)墻布置，中間留出運(yùn)輸通道和操作空間，其工藝管道大多沿墻、地面或樓面進(jìn)行敷設(shè)，多條管路集中布置，并平行敷設(shè)，做到整齊、美觀、易操作。管道上標(biāo)注有管道等級、管道號、標(biāo)高、物料名稱等。不同管道的相互位置，管道與墻壁、管道與管道之間的距離均參照化工管道相關(guān)設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行確定。
4具體問題及解決方案
4.1投料操作不方便及解決方案
提取操作間的常規(guī)做法是將提取罐的罐耳掛在樓板上，投料口高出地面的高度給投料操作帶來了困難，需要搭建鋼平臺作為投料層，每次進(jìn)行提取操作前，操作人員先上至鋼平臺，再將物料投入提取罐，這種做法的缺點(diǎn)是操作不方便，且操作周期長。為了解決上述問題，在設(shè)計(jì)時可考慮在提取操作間局部做降板，如圖4所示，使提取罐的投料口處基本與地面平齊，這樣操作人員可直接將物料投入其中。改進(jìn)后的操作層兼顧了2種功能，即投料和操作可以同時進(jìn)行，這樣使操作更加快捷，效率得到提高。
4.2出渣間污染及解決方案
中藥提取后的藥渣排放是中藥提取車間的一大難題。2010版GMP中指出：中藥提取后的藥渣如需暫存、處理時，應(yīng)當(dāng)有專用區(qū)域。為了更好地避免出渣間出現(xiàn)污染問題，設(shè)計(jì)時應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：
（1）出渣間與其他功能間最大限度隔離，直接對外開門，將其對生產(chǎn)區(qū)的污染風(fēng)險降至最低。
（2）出渣間不再設(shè)計(jì)貯渣功能，藥渣卸下后立即運(yùn)走，每次出渣后立即進(jìn)行全面徹底清洗。借助藥渣壓縮設(shè)備，將藥渣卸到料斗內(nèi)，由壓縮機(jī)擠壓至原體積的1/2，擠壓所產(chǎn)生的污水由排污管道排入污水管，這樣不僅避免了藥渣和藥渣滴水造成的二次污染，同時由于藥渣體積壓縮而大幅降低了運(yùn)輸費(fèi)用。
（3）出渣間的墻面、地面宜采用瓷器類物質(zhì)貼面，既便于清洗，又能避免提供霉菌附著基。
（4）在滿足出渣口能打開及方便出渣車進(jìn)出的前提下，出渣高度盡可能降低，避免飛濺的渣水造成二次污染。
5結(jié)語
1.1儀器
UV-VIS8500分光光度計(jì)；電子天平BP121S；歐前胡素對照品（供含量測定用，批號為110826-200511，由中國藥品生物制品檢定所提供）；其它試劑均為分析純。
1.2藥材
本實(shí)驗(yàn)所用白芷藥材購于四川省中藥材公司，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定為傘形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.etHook.f.的干燥根。
2方法與結(jié)果
2.1粉碎度的考察
2.1.1樣品溶液的制備取白芷適量，粉碎，分別稱取過10目，20目，30目的樣品各20g，分別加入8倍量75%乙醇，提取3次，3h/次，藥液濾過，分別定至500ml，備用。
2.1.2白芷總香豆素含量測定照紫外分光光度法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄IVA）測定。
精密量取歐前胡素對照品溶液（0.0522mg/ml）1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml，分別置于10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇作為空白液。于300nm處測定A值，以濃度（C）對吸收度（A）回歸。得回歸方程：A=47.3953C+0.01659（r=0.9999）。精密量取上述備用液各0.8ml于100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為供試品液，測定計(jì)算即得［2］。
2.1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
2.2乙醇提取工藝研究［3～6］
2.2.1樣品溶液的制備取白芷，粉碎，過20目篩，按所選因素及水平(見表2)，采用L9(34)正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)(見表3)進(jìn)行白芷提取，得9號樣品溶液，備用。表1粉碎度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.2.2水浸出物量（干膏率）的測定精密吸取上述備用液30ml，分別置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置烘箱中干燥3h（105℃），取出，置于干燥器中放置30min，稱重，計(jì)算干膏收得率。
2.3白芷總香豆素含量測定照紫外分光光度法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄IVA）測定精密量取備用液0.8～1.6ml于100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為供試品液，測定，代入上述回歸方程，計(jì)算，即得。
2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用中國醫(yī)統(tǒng)軟件包（PEMS）進(jìn)行處理分析，結(jié)果見表2～4。表2因素水平（略）表3正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（略）
3結(jié)論
從以上粉碎度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，采用過20目篩的白芷粗粉進(jìn)行提取，提取效果較好；從正交實(shí)驗(yàn)方差分析結(jié)果可以看出，B因素有顯著的影響，影響因素B>C>A>D；且B3，C3，A2，D1為最佳，故白芷乙醇提取最佳工藝為：加8倍量75%乙醇，提取3次，3h/次。表4方差分析（略）
4討論
在粉碎度考察實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)粉碎度過細(xì)，提取率反而下降，故白芷提取過程中不宜粉碎過細(xì)，避免提取過程中產(chǎn)生糊化現(xiàn)象，影響提取效果。
【參考文獻(xiàn)】
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1．1供試品溶液的制備取酸漿粗多糖置于50mL錐形瓶中，加適量純水，沸水浴使溶解，趁熱過濾，并用熱水洗殘?jiān)?，將洗液與錐形瓶中溶液混合，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻即得。
1．2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取葡萄糖10．31mg，置于10mL容量瓶中，加適量水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取0．0、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8mL于25mL比色管，分別加水補(bǔ)1．0mL。上述溶液分別加3，5-二硝基水楊酸試液1．5mL，于沸水浴中加熱5min，流水冷卻，加水稀釋至25mL刻度。以相應(yīng)溶液為空白，在520nm處測定吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1．3酸漿果實(shí)中多糖含量的測定精密量取供試品溶液2．5mL，置于50mL錐形瓶中，加水2．5mL，加6mol/L鹽酸溶液5mL，在沸水浴中加熱30min，用流水冷卻后加酚酞指示液1滴，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至微紅色，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得總糖溶液。精密量取供試品溶液5mL，置于10mL容量瓶中，加酚酞指示液1滴，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至微紅色，加水至刻度，搖勻，即得單糖溶液。精密量取上述總糖溶液和單糖溶液1mL，分別置于10mL具塞刻度試管中，加純水至2mL，分別精密加入3，5-二硝基水楊酸試液2mL，混勻，在100℃水浴中加熱5min，取出，立即用冰水浴冷卻至室溫，加水3mL搖勻。用相應(yīng)的試劑作空白，照分光光度法在520nm處依法顯色，測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中計(jì)算出總糖和單糖濃度，由總糖含量減去單糖含量，即得多糖的含量。
1．4單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇料液比、醇沉濃度、提取時間、提取次數(shù)4個影響因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，其中料液比分別為1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70，醇沉濃度分別為55%、65%、75%、85%、95%，提取時間分別為1h、1．5h、2h、2．5h、3h，提取次數(shù)分別為1、2、3次。
1．5正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及單因素實(shí)驗(yàn)，選擇料液比、醇沉濃度、提取時間、提取次數(shù)4個影響因素，每個因素取3個水平，以多糖提取率為主要考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2結(jié)果
以粗多糖的含量為指標(biāo)，在料液比為1∶60、乙醇濃度為85%、提取時間2．5h、提取次數(shù)為2次時，提取出的多糖含量最高。單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素水平見表1，正交實(shí)驗(yàn)表如表2。按照上述最佳提取工藝提取條件，對一組樣品進(jìn)行驗(yàn)證，測定多糖的提取含量為10．5353、10．5533、10．7517、10．5866、10．6721mg/g。
3討論
1.1儀器日本島津高效液相色譜儀（N2000色譜工作站）；UV－1700紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）；HHSY21-Ni4-C型電熱恒溫水浴鍋（北京長源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。
1.2材料飛蓬干燥全草（采自長白山，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)鄧明魯教授鑒定）；野黃芩苷對照品，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（供含量測定用）購于中國藥品生物制品檢定所；其余試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1飛蓬總黃酮含量測定
2.1.1對照品溶液制備精密稱取干燥至恒重的無水蘆丁對照品5.05mg置于25ml容量瓶中，加適量70%的乙醇超聲處理5min，用乙醇定容至刻度，搖勻，得濃度為0.202mg/ml的對照品儲備液。
2.1.2供試品溶液制備精密稱取樣品干燥粉末1g，置于50ml容量瓶中，加適量70%的乙醇超聲處理5min，用乙醇定容至刻度，搖勻，作為供試品液。
2.1.3測定波長選擇精密吸取蘆丁對照品溶液0.5ml和樣品溶液1ml于具塞試管中，精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6min，再加入10%硝酸鋁0.3ml，搖勻，放置6min，加4%NaOH溶液4ml，用70%的乙醇定容至10ml，搖勻，放置10～15min。以相同試劑為空白。在400～900nm波長范圍內(nèi)掃描，記錄最大吸收波長為510nm，見圖1。
圖1蘆丁和飛蓬樣品最大吸收波長圖
2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密吸取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁溶液0.0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分別加入6支具塞試管中，按照“2.1.3”項(xiàng)操作，于510nm處測定吸光度。并以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，蘆丁對照品溶液濃度（C,mg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A＝11.227C-0.013，r＝0.9999（n=6），見圖2。結(jié)果表明：在0.101～1.01mg范圍內(nèi)蘆丁對照品顯色后的吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。
圖2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
2.1.5供試品含量測定取供試品溶液0.2ml于具塞試管中，按照“2.1.3”項(xiàng)下操作，于510nm處測定吸光度,然后根據(jù)線性方程計(jì)算其總黃酮的含量。
2.2飛蓬燈盞乙素含量測定
2.2.1色譜條件ChmmasilC18柱(5μm，4.6mm×150mm)；測定波長λ＝335nm（依衛(wèi)生部頒發(fā)的藥品標(biāo)準(zhǔn)）；流動相：甲醇－0.1％磷酸（40：60）；流速1.0ml／min。
2.2.2對照品溶液制備精密稱取野黃芩苷對照品1.05mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，過濾，搖勻，制成濃度為0.105mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
2.2.3供試品溶液制備精密稱取樣品干燥粉末1g，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，過濾，搖勻，作為供試品液。
2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密量取對照品溶液2，4，6，8，10，12，14，16μl注入液相色譜儀，測定野黃芩苷色譜峰的面積。并以吸收峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（C,μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=1359349.2409C-68257.6517，r=0.9999（n=8），結(jié)果表明野黃芩苷濃度在0.21～1.68μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。
2.2.5供試品含量測定精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得，見圖3。
2.3提取工藝的優(yōu)選
2.3.1提取溶劑的優(yōu)選稱取100g飛蓬，分別加入14倍量不同的提取溶劑，80℃水浴恒溫提取2h，抽濾，定容，分別按“2.1”測定總黃酮含量，按“2.2”項(xiàng)中方法測定燈盞乙素含量，結(jié)果見表1。表1不同提取溶劑的總黃酮和燈盞乙素含量
從表1可知，堿液提取雖然得膏率很高，但是總黃酮和燈盞乙素含量低，且堿液提取加熱容易破壞黃酮類化合物的母核。用水和乙醇作為提取溶劑，雖然得膏率相同，但是水提取的總黃酮和燈盞乙素含量較低，且由于其極性大，易把蛋白質(zhì)、糖類等溶于水的成分浸提出來，使得提取液存放時，易腐敗變質(zhì)。乙醇提取的總黃酮和燈盞乙素含量高，因此為這3種溶劑中的最佳提取溶劑。下面的實(shí)驗(yàn)均采用乙醇作為提取溶劑，分別選取乙醇浸漬法、滲漉法、回流提取法、索氏提取法、超聲波法進(jìn)行提取。
2.3.2提取方法的優(yōu)選稱取100g飛蓬，分別選取乙醇浸漬法、滲漉法、回流提取法、索氏提取法、超聲波法進(jìn)行提取，提取液抽濾，定容，分別按“2.1”項(xiàng)中方法測定總黃酮含量，按“2.2”項(xiàng)中方法測定燈盞乙素含量。不同方法提取的飛蓬總黃酮和燈盞乙素含量測定結(jié)果見表2。表2不同提取方法的總黃酮和燈盞乙素含量
經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明，不同提取方法直接影響著醇提工藝中的總黃酮和燈盞乙素的測定結(jié)果。綜合考慮，用回流法提取飛蓬中的總黃酮和燈盞乙素是比較合適的方法。為此，設(shè)計(jì)正交，進(jìn)一步優(yōu)化采用乙醇回流法進(jìn)行提取的最佳醇提工藝。
2.3.3正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選飛蓬乙醇回流提取工藝根據(jù)實(shí)際情況，選擇乙醇濃度、溶媒量、提取時間、提取次數(shù)作為考察因素，每個因素選擇3個水平，因素水平表見表3。表3正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平按均勻取樣的規(guī)則取飛蓬100g，按L9（34）正交實(shí)驗(yàn)表安排實(shí)驗(yàn)，每組兩次平行實(shí)驗(yàn)，以總黃酮和燈盞乙素含量為評價指標(biāo)，測定結(jié)果取平均值。結(jié)果見表4。表4正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果表5方差分析
以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，直觀分析結(jié)果表明A2>D3>C1>B2；以燈盞乙素提取率為考察指標(biāo)，直觀分析結(jié)果表明A2>D3>C3>B3，方差分析（表5）結(jié)果表明A因素和D因素對總黃酮及燈盞乙素的提取均具有顯著性影響，而B因素及C因素對提取結(jié)果沒有影響，為了節(jié)省時間和能源，最終確定工藝條件為A2B1C1D3，即以70%乙醇回流提取3次，1h/次，加醇量為每次14倍量。
2.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)稱取藥材按最佳工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明總黃酮和燈盞乙素含量與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果吻合，取得較好的結(jié)果，說明該工藝可行。
3討論［4］
目前，提取工藝篩選試驗(yàn)中常用化學(xué)法、生物學(xué)法及有效浸出物綜合評價的方法，因此實(shí)驗(yàn)中僅用一種評價指標(biāo)篩選提取工藝條件往往不夠全面。而且飛蓬中含有多種黃酮類化合物，采用紫外分光光度法測得結(jié)果通常是總黃酮的含量，并不能準(zhǔn)確反映燈盞乙素的含量，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)研究建立了燈盞乙素含量測定的HPLC法，提高了準(zhǔn)確度，穩(wěn)定可靠。
在實(shí)驗(yàn)中，曾試用了甲醇－0.5％磷酸溶液(45∶55)、甲醇－1％磷酸溶液(35∶65)、乙腈－1％冰醋酸(25∶75)為流動相條件，經(jīng)反復(fù)比較，以正文所選流動相重復(fù)性最佳，出峰時間較快，峰形尖銳、對稱，且燈盞乙素主峰與雜質(zhì)峰明顯分離。
通過L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，最終確定了飛蓬中總黃酮和燈盞乙素醇提工藝的最佳條件，并通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明該工藝，穩(wěn)定可靠，有效富集了飛蓬中總黃酮和燈盞乙素的含量，為進(jìn)一步開發(fā)飛蓬中總黃酮有效部位奠定基礎(chǔ)。
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［4］謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社,2000：14.
【關(guān)鍵詞】牡丹皮；正交設(shè)計(jì)；提取工藝；芍藥苷；高效液相色譜法
牡丹皮為毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，具有清熱涼血，活血化瘀的功效。牡丹根皮中含芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷和丹皮酚新苷等成分。藥理實(shí)驗(yàn)表明，芍藥苷體內(nèi)、體外均能抑制ADP或膠原誘導(dǎo)的血小板聚集［1］，應(yīng)屬牡丹皮抗缺血性中風(fēng)的主要有效成分之一。本文采用正交實(shí)驗(yàn)法，以HPLC法測定的芍藥苷的提取量為指標(biāo)，對牡丹皮乙醇提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，為牡丹皮的開發(fā)應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1儀器和試藥
高效液相色譜儀：日本島津10Avp高效液相色譜儀(LC10Atvp雙泵，SPDM10Avp二極管陣列檢測器，SIL10Advp自動進(jìn)樣器，CTO10Avp柱溫箱);HypersilODS填料色譜柱(ID4.6×250mm)(大連依利特化學(xué)儀器有限公司);分析天平：LIBRORL16ODTP分析天平(日本島津)、AE240分析天平(瑞士METTLER);芍藥苷對照品(07369710)：中國藥品生物制品檢定所(為含量測定用)。牡丹皮藥材(購自四川省電江藥材基地，經(jīng)鑒定為牡丹皮正品)，所用乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。
2提取工藝研究
2.1方法本文采用乙醇加熱回流法對牡丹皮進(jìn)行提取，選擇回流次數(shù)、乙醇濃度、回流時間和乙醇用量等4個主要影響因素，每個因素選取3個水平。選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選定的因素水平表見表1。
表1因素水平表（略）
2.1.1色譜條件經(jīng)試驗(yàn)，確定流動相為乙腈水(20：80)，流速1ml/min，柱溫40℃，測定波長為230nm進(jìn)樣量4μl。
2.1.2對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品2.40mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含芍藥苷96μg)。
2.2供試樣品溶液的制備精密稱取9份牡丹皮藥材粗粉50g，按L9(34)表各試驗(yàn)號規(guī)定方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，提取液分別濃縮并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶，用適量乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，即得樣品溶液。精密吸取上述樣品溶液各1ml，分別置25ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試樣品溶液。
2.3供試樣品溶液測定及結(jié)果精密吸取供試樣品溶液與對照品溶液各4μl，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算出供試樣品溶液中芍藥苷的濃度，結(jié)果見表2；方差分析見表3。
表2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（略）
由以上結(jié)果可知，牡丹皮乙醇提取的最佳工藝條件確定為A3B2C1D1，即5倍量75%乙醇提取3次，每次1h。
表3方差分析（略）
3小結(jié)
3.1芍藥苷為牡丹皮中主要活性成分之一，其含量測定方法較多，如毛細(xì)管區(qū)帶電泳法［2］，薄層掃描法［3］，高效液相色譜法［4-5］等。筆者采用HPLC法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行了相應(yīng)的方法學(xué)試驗(yàn)。結(jié)果表明本法各方面符合中華人民共和國藥典(2005版)和中藥新藥研制的有關(guān)規(guī)定。在試驗(yàn)中，根據(jù)牡丹皮含量測定結(jié)果，制定了牡丹皮中芍藥苷的含量限度，為控制實(shí)驗(yàn)用牡丹皮藥材的質(zhì)量提供了依據(jù)。本文所選含量測定方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。
3.2關(guān)于芍藥苷含量測定方法中流動相的選擇，曾選用乙腈水(10：90、20：80、30：70)和甲醇水(20：80、30：70、40：60)等依次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示乙腈水(20：80)作流動相時，牡丹皮供試品色譜中芍藥苷與雜質(zhì)峰可達(dá)基線分離，峰形對稱，且保留時間適宜，故采用乙腈水(20：80)作為流動相。
3.3有文獻(xiàn)記載以水提醇沉法提取丹皮中芍藥苷［6］，但考慮到芍藥苷醇溶性優(yōu)于水溶性，在前期實(shí)驗(yàn)中經(jīng)比較，水提醇沉提取物中芍藥苷得率低于乙醇提取物，且其操作較繁，故本文直接采用乙醇提取法，正交實(shí)驗(yàn)得出最佳提取工藝條件為乙醇濃度75%，乙醇用量為藥材量的5倍，加熱回流時間為1h，回流次數(shù)為3次。
致謝；河南省駐馬店市藥品檢驗(yàn)所
【參考文獻(xiàn)】
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［4］黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1994.
【關(guān)鍵詞】舒督丸提取溶劑提取工藝柚皮苷
StudiesontheExtractionProcessofShuDuPill
Abstract：ObjectiveToselecttheextractionsolventandconditionsofShuDuPill.MethodsAceticacidwrithingmethodonmicewasusedtocomparetheanalgesiceffectsofthewaterextractandthealcoholextractorthogonaldesignwasusedtooptimizethereasonableextractionconditionswiththeevaluationmarkerssuchasnaringinextractionrateandwaterextract.ResultsTheanalgesiceffecttreatedwiththewaterextractismoresignificant.Theextractionconditionswereasfollows：themedicalmaterialwassoakedin6，4，4，2timeswaterandboiled4times,3，2，1，1hoursforeachtime.ConclusionTheextractionconditionsestablishedcanmaketheextractionrateofactivecomponentshighandmakethetherapyandqualityoptimal.
Keywords：ShuDuPill；Theextractionsolvent；Theextractionprocess；Naringin
舒督（濃縮）丸是治療強(qiáng)直性脊柱炎的中成藥，由骨碎補(bǔ)、桑寄生、狗脊、絡(luò)石藤、牛膝等藥味組成。根據(jù)強(qiáng)直性脊柱炎的病因與臨床癥狀，方劑中藥物的抗炎鎮(zhèn)痛、活血祛瘀、調(diào)節(jié)免疫功能等是其主要藥理作用。據(jù)文獻(xiàn)報道［1～3］，骨碎補(bǔ)中的柚皮苷與絡(luò)石藤中的木犀草素等有抗炎作用；桑寄生中的槲皮素等具有鎮(zhèn)痛作用；牛膝中的多糖等成分有改善機(jī)體免疫功能等多種藥理活性。這些成分的溶解性較復(fù)雜。根據(jù)強(qiáng)脊炎疼痛癥狀突出的臨床表現(xiàn)，本研究以小鼠鎮(zhèn)痛藥效試驗(yàn)為指標(biāo)，對該方劑的提取溶劑進(jìn)行了篩選，并以柚皮苷提取率和水總浸出物提取率為評價指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選其提取工藝條件。
1器材
1.1儀器與試藥
Agilent1100高效液相色譜。柚皮苷中國藥品生物制品鑒定所（批號：110722200309，含量測定用）。所用試劑均為分析純，含量測定試劑為色譜純。藥材購于河南省藥材公司，骨碎補(bǔ)藥材中柚皮苷含量為0.75%。
1.2實(shí)驗(yàn)動物
昆明種小鼠，河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供（許可證號：SYXK（豫）20050012），雌雄各半，體重18～22g。河南省食品藥品檢驗(yàn)所動物室許可證號：SYXK（豫）20050011。動物飼料為標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，購自北京科奧協(xié)力飼料有限公司（許可證號：SCXK（京）20050007）。
2方法與結(jié)果
2.1提取溶劑的選擇
2.1.1供試樣品的制備
按處方比例稱取藥材兩份，一份水煎煮兩次（6倍量/2h，4倍量/1h），另一份75%乙醇回流2次（6倍量/2h，4倍量/1h）過濾，合并藥液，減壓濃縮，分別制成1.0g原生藥/ml的流浸膏，密封，滅菌，備用。
2.1.2藥效試驗(yàn)
取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分組，灌胃給藥，用醋酸扭體法比較不同溶劑提取物的鎮(zhèn)痛效果［4］。結(jié)果見表1。表1舒督丸不同溶劑提取物對小鼠疼痛的抑制作用（略）
藥效試驗(yàn)結(jié)果顯示，舒督丸不同溶劑提取物均可抑制小鼠疼痛，其中以水提物鎮(zhèn)痛效果最好。因此，確定以水為提取溶劑。
2.2提取工藝因素的優(yōu)選
2.2.1柚皮苷的含量測定方法［5］
2.2.1.1色譜條件
ZOPBOXISBC18（4.6mm×200mm，5μm）色譜柱；流動相甲醇醋酸水（35∶4∶65）；檢測波長283nm。
2.2.1.2對照品溶液的制備
精密稱取柚皮苷對照品20mg，甲醇定溶于100ml量瓶中，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每毫升含柚皮苷60μg）。
2.2.1.3供試品溶液的制備與測定
取含相當(dāng)于骨碎補(bǔ)0.3g的提取液，稀硫酸調(diào)pH值3～4,水浴蒸干，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl,注入液相色譜儀,于283nm處測定并計(jì)算柚皮苷含量，計(jì)算提取率。
2.2.2水總浸出物的測定方法
分別精密量取水提藥液各25ml，按浸出物測定法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄XA）操作，以25ml提取液相當(dāng)于原藥材量作為分母，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的浸出率。
2.2.3提取工藝因素與水平的正交實(shí)驗(yàn)選擇加水量、提取時間和提取次數(shù)3個因素，每個因素選擇3個水平，見表2。用L9（34）正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。表2實(shí)驗(yàn)因素水平表（略）
取復(fù)方飲片9份，每份354g，按表3正交表設(shè)計(jì)方案進(jìn)行回流煎煮提取，合并提取液，濾過，吸取藥液適量，測定柚皮苷含量和水總浸出物量，計(jì)算提取率，見表3。表3舒督丸提取工藝正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果（略）
2.2.4舒督丸提取工藝因素的正交試驗(yàn)結(jié)果與分析結(jié)果見表3～4。表4舒督丸提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析（略）
由綜合評分直觀分析可知，上述因素中，B因素影響最明顯，應(yīng)取3水平；C因素次之，應(yīng)取3水平；A因素應(yīng)取2水平。
由上表可看出，顯著影響提取效率的工藝因素是B。取重要因素較高水平的組合，得到最佳工藝條件為：A2B3C3。即提取4次，每次分別為3，2，1，1h，每次加水量分別為6，4，4，2倍。
2.3驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
取復(fù)方飲片，按最佳工藝條件重復(fù)提取3次，測定柚皮苷和水總浸出物得率。結(jié)果見表5。表5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出:所篩選出來的工藝合理可行,穩(wěn)定可靠,具有可操作性和重現(xiàn)性。
3討論
3.1舒督丸方劑中有效成分既有水溶性，也有脂溶性的，理論上既需要用親脂性溶劑也需要用水提取，才能使有效成分充分溶出。但是復(fù)方中各藥材成分間在提取時往往會發(fā)生復(fù)雜的相互作用，從而使有效成分溶解度及存在狀態(tài)發(fā)生變化影響到藥效。因此，采用藥效學(xué)方法篩選提取溶劑,與常規(guī)的化學(xué)法相比,其篩選結(jié)果與臨床用藥效果更為接近。本實(shí)驗(yàn)以小鼠醋酸扭體法比較該方劑水和乙醇為溶劑的提取物的鎮(zhèn)痛效果，結(jié)果表明以水為溶劑效果優(yōu)于乙醇，與該藥原配制用溶劑產(chǎn)生的療效一致。
3.2由藥材成分浸出原理可知，溶劑對藥材的浸潤與滲透、溶解與解吸和成分?jǐn)U散置換過程，在第1次提取即已經(jīng)完成，后續(xù)的多次提取，主要是更換溶劑，保持濃度差。所以，在本研究中，每個煎煮時間和加水量水平設(shè)計(jì)為依次遞減。結(jié)果證明優(yōu)化出的提取工藝參數(shù)可以使有效成分達(dá)到較高的提取率，節(jié)省了大量的工時，降低了水和能耗。
3.3在柚皮苷含量測定時發(fā)現(xiàn)復(fù)方提取物中柚皮苷提取率很低，與其溶解性能不符。通過對方中骨碎補(bǔ)與其他藥材兩兩配伍提取實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，是由于其與桑寄生中某成分形成了水溶性絡(luò)合物，影響了柚皮苷的含量測定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該絡(luò)合物在酸性溶液中能夠迅速解離，可以避免對柚皮苷含量測定的干擾，故在測定復(fù)方中柚皮苷含量時，需用稀硫酸調(diào)節(jié)溶液pH至酸性。
【參考文獻(xiàn)】
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【關(guān)鍵詞】銀翹合劑提取工藝
Abstract:ObjectiveToresearchtheextractionprocessofYinqiaoMixture.MethodsThreefactors，includingthewatervolume,thetimeofdistillation,thetimesofdistillationwerestudiedwithorthogonaldesign〔L9（34）〕.Eachfactorhadthreelevels.Totalextractandchlorogenicacidweremarkers.Theextractingtimeforvolatileoilfromherbaschizonepetae，herbamenthaeandfructusforsythiaewasstudlied.ResultsTheoptimalwaterextractionprocesswasthatherbsweredistilledforthreetimesbyaddingwater，whichwas6timesamountoftheherbs，40minutesonceatime.ConclusionThismethodcanbeusedastheextractionprocessforYinqiaoMixture.
Keywords:YinqiaoMixture；Extractionprocess
銀翹合劑由金銀花、連翹、甘草等中藥組成，具有辛涼解表、清熱解毒的作用，用于感冒、咳嗽、發(fā)熱、口干、頭痛、咽痛等治療。本實(shí)驗(yàn)用不同指標(biāo)對其提取工藝進(jìn)行了研究。結(jié)果如下。
1儀器與試藥
1.1儀器
Agilent1100高效液相色譜儀：四元泵（G1311A）；柱溫箱（G1316A）；VWD檢測器（G1314A）；紫外檢測器軟件：AgilentChemstation；101-1A型電熱鼓風(fēng)干燥箱，南通滬通制藥機(jī)械設(shè)備廠；KQ-1000E型醫(yī)用超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；1/10萬電子分析天平(BP-211D型，德國Sartorius)。
1.2試劑與藥品
綠原酸對照品（含量測定用，批號0805-9703），購自中國藥品生物制品檢定所；高效液相色譜所用試劑為色譜純；水為超純水；其他試劑為分析純。所用中藥材均購于江蘇省藥材公司，并由本室專家鑒定。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件［1］
色譜柱為Aps-2HYPERSILThermo；VWD檢測器；流動相為乙睛∶0.4%磷酸溶液=9∶91；檢測波長327nm；柱溫30℃；流速1ml/min；進(jìn)樣量10.0μl。
2.2對照品溶液的制備及回歸方程精密稱取綠原酸對照品6.77mg，加50%甲醇溶解制成每毫升含綠原酸0.2708mg的對照品溶液。用50%甲醇分別稀釋為0.1354，0.0677，0.03385，0.01693，0.00846，0.00423，0.00213，0.00106μg/μl的對照品溶液。各濃度對照品溶液10.0μl，按以上色譜條件進(jìn)行分析，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X（μg），峰面積積分值（mAu）Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=4104.23650X-2.98105，r=0.99998。綠原酸的量在0.0106～1.354μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.3樣品處理及實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響提取效果的主要因素有提取加水量，提取時間，提取次數(shù)3個因素，每個因素選擇3水平，以綠原酸的量及浸膏量為指標(biāo)（權(quán)重值分別為70%，30%）進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選出最佳工藝條件。因素水平見表1。表1因素水平（略）
按處方比例稱取金銀花，連翹等藥材56g按表2進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，合并各次提取液濃縮并定容至100ml，作為供試品溶液。取供試品溶液2ml，加50%甲醇稀釋定容至50ml，超聲10min，離心10min，取上清液2ml，加50%甲醇稀釋定容至10ml，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取10.0μl進(jìn)樣。利用回歸方程計(jì)算出綠原酸的進(jìn)樣量（μg），綠原酸量（mg）=綠原酸的進(jìn)樣量×1250。在上述供試品溶液取2ml，恒重，得干浸膏量m（mg），浸膏量（mg）=m×50。方差分析結(jié)果見表3。（注：m即為2ml藥液恒重所得干浸膏重）。表2正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及數(shù)據(jù)分析（略）
表3方差分析（略）
2.4揮發(fā)油提取工藝的研究用揮發(fā)油測定法分別對荊芥穗、薄荷、連翹三藥材對提取時間進(jìn)行研究。分別稱取藥材500g，加6倍水量，加熱回流，考察。結(jié)果見表4。表4揮發(fā)油提取率-時間（略）
2.5優(yōu)選工藝驗(yàn)證按處方比例稱取各藥材56g，平行兩份，加6倍量水，加熱回流提取3次，40min/次，合并各次提取液濃縮并定容至100ml，作為供試品溶液。取供試品溶液2ml，加50%甲醇稀釋定容至50ml，超聲10min，離心10min，取上清液2ml，加50%甲醇稀釋定容至10ml，經(jīng)微孔濾膜（0.45μm）濾過，取10.0μl進(jìn)樣。利用回歸方程計(jì)算出綠原酸的進(jìn)樣量（μg），綠原酸量（mg）=綠原酸的進(jìn)樣量×1250。在上述供試品溶液取2ml，恒重，得干浸膏量m（mg），浸膏量（mg）=m×50。結(jié)果見表5。表5優(yōu)選工藝驗(yàn)證（略）
3討論
從方差分析的結(jié)果表明，提取的次數(shù)有顯著差異，其它兩因素?zé)o顯著差異，結(jié)合直觀分析，確定工藝為A3B3C3，但加水量、提取時間對提取效果影響不大?？紤]節(jié)約成本，縮短工藝時間，擬考慮為A1，C1。
分別對3味有揮發(fā)油的藥材進(jìn)行了考察，結(jié)果在兩小時內(nèi)其揮發(fā)油均能較完全提取，提取率達(dá)90%以上。其提取時間與水提工藝時間相同即可。
驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該工藝可行。即以加6倍量水，加熱回流提取3次，40min/次，為最佳提取工藝。
